[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于檢測(cè)沙門(mén)氏菌的分子馬達(dá)生物傳感器試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110307504.4
• 申請(qǐng)日: 2011-10-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103045718A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張捷;顧德周;張惠媛;王佩榮;樂(lè)加昌;陳廣全
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中華人民共和國(guó)北京出入境檢驗(yàn)檢疫局;中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/42;C12Q1/04;C12R1/42;C12R1/63;C12R1/19;C12R1/01
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是關(guān)于食品微生物快速檢測(cè)技術(shù)的一種。

背景技術(shù)

傳統(tǒng)的病原菌檢測(cè)方法要求對(duì)每個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行非選擇性增菌、選擇性增菌、分離、篩選和鑒定等步驟，一般需要5天才能出具檢測(cè)報(bào)告，嚴(yán)重影響貨物的品質(zhì)和貨架壽命。一些新的技術(shù)如PCR技術(shù)、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)、生物芯片技術(shù)等檢測(cè)方法仍依賴(lài)于傳統(tǒng)的檢測(cè)步驟，即需要進(jìn)行增菌，耗時(shí)耗力，完成一次檢測(cè)通常需要幾天的時(shí)間。這樣不僅增加了實(shí)驗(yàn)室的工作量，而且也不利于食品工業(yè)中生產(chǎn)流程的監(jiān)測(cè)、終產(chǎn)品的質(zhì)量控制以及政府部門(mén)對(duì)食品安全的管理和控制。由于進(jìn)出口食品的大量增加，因此急需可靠有效的快速檢測(cè)方法，縮短檢測(cè)時(shí)間，促進(jìn)我國(guó)食品的進(jìn)出口貿(mào)易。

發(fā)明內(nèi)容

以受控分子馬達(dá)技術(shù)為核心，集成核酸探針識(shí)別、熒光探針標(biāo)記與檢測(cè)等技術(shù)，建立了一個(gè)全新概念的快速檢測(cè)技術(shù)體系。利用ATP酶作為載體對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行檢測(cè)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速的特點(diǎn)。在F₀F₁-ATPase分子馬達(dá)連接上特異的核酸探針，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)特定食品微生物的快速、特異性、高通量的檢測(cè)。本發(fā)明可將檢測(cè)時(shí)間縮短至2天，且檢測(cè)靈敏度能達(dá)到10²CFU/ml，滿(mǎn)足現(xiàn)有的食品微生物檢測(cè)范圍。

附圖說(shuō)明

附圖1為分子馬達(dá)生物傳感器模式圖(其中a、b、c、α、β、δ、γ、ε均為ATP合酶亞基)，1為ε亞基抗體，2為鏈霉親和素(Strptavidin)，3為N-biotin，4為invA探針，5為沙門(mén)氏菌單鏈DNA。

附圖2為chro?invA對(duì)不同種菌株的檢測(cè)結(jié)果，縱坐標(biāo)表示熒光值，橫坐標(biāo)表示檢測(cè)的樣本，其中1為水，2為沙門(mén)氏菌，3為副溶血性弧菌，4為霍亂弧菌，5為單增李斯特氏菌，6為大腸桿菌。

附圖3為chro?invA對(duì)30株沙門(mén)氏菌樣本的檢測(cè)結(jié)果，縱坐標(biāo)表示熒光值，橫坐標(biāo)表示檢測(cè)的樣本，1～30為食品檢測(cè)樣本編號(hào)。

具體實(shí)施方式

根據(jù)沙門(mén)氏菌invA基因設(shè)計(jì)特異性核酸探針5’gtgaaattatcgccacgttcgggcaa，其中探針的5’用生物素進(jìn)行標(biāo)記。將該探針通過(guò)生物素抗體連接在分子馬達(dá)上面，利用分子馬達(dá)生物傳感器即可對(duì)待測(cè)樣本的DNA進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)樣品為沙門(mén)氏菌DNA時(shí)，檢測(cè)體系的熒光值會(huì)發(fā)生明顯的變化，通過(guò)這一變化即可判斷樣本為陽(yáng)性。為此，我們?cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)試劑盒，可以方便、快速對(duì)食品中的沙門(mén)氏菌進(jìn)行檢測(cè)。

試劑盒組成：