[發(fā)明專利]一種水環(huán)境微生物鑒定方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110295515.5 | 申請日： | 2011-09-28 |
| 公開（公告）號： | CN102304586A | 公開（公告）日： | 2012-01-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 靖德兵;王東;趙慧峰;單保慶 | 申請（專利權(quán)）人： | 首都師范大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京兆君聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11333 | 代理人： | 胡敬紅 |
| 地址： | 100048 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 水環(huán)境 微生物 鑒定 方法 | ||
1.一種水環(huán)境微生物鑒定方法，包括如下步驟：
(1)提取底泥中的微生物DNA，
(2)用采用通用引物對GC-F338和R518，PCR擴(kuò)增目的片段，
所述引物GC-F338：5′-CGC?CCG?CCG?CGC?GCG?GCG?GGC?GGG?GCG?GGG?GCA?CGG?GGG?GTAC?GGG?AGG?CAG?CAG-3′，
R518：5’-ATT?ACC?GCG?GCT?GCT?GG-3’；
(3)DGGE電泳分離PCR產(chǎn)物，
(4)DGGE條帶的切膠回收后重新PCR，所述引物為F338和R518，
所述引物F338：5’-TAC?GGGAGG?CAG?CAG-3′，
R518：5’-ATT?ACC?GCG?GCT?GCT?GG-3’；
(5)回收二次PCR產(chǎn)物，與表達(dá)載體連接，轉(zhuǎn)化，培養(yǎng)，提取質(zhì)粒，PCR檢測，
(6)陽性質(zhì)粒測序，確定所含微生物的種類。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述表達(dá)載體為Pmd18-T載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述轉(zhuǎn)化所用生物體為DH5α感受態(tài)細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述PCR檢測中所述引物為M13-47和RV-M，
所述引物M13-47：5′-CGC?CAG?GGT?TTT?CCC?AGT?CAC?GAC-3′，
RV-M：5′-GAG?CGG?ATA?ACA?ATT?TCA?CAC?ACA?AGG-3′。
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