[發(fā)明專利]低甘油合成、高酒精耐性的工業(yè)釀酒酵母菌株及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110293244.X
• 申請日: 2011-09-29
• 公開（公告）號: CN102329743A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳雪昌;王品美;鄭道瓊;陶香林;劉天喆
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12P7/06;C12N15/81;C12N15/01;C12R1/865;C12R1/465
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一株低甘油合成、高酒精耐性的工業(yè)釀酒酵母菌株——釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)FG1，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學，430072，保藏編號：CCTCC?No：M2011274，保藏日期：2011年8月1日。

2.權(quán)利要求2所述釀酒酵母CCTCC?No：M?2011274在微生物工業(yè)濃醪發(fā)酵生產(chǎn)酒精中的應(yīng)用。

3.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為：將釀酒酵母CCTCC?No：M?2011274接種至玉米糖化醪發(fā)酵液，30～35℃發(fā)酵60～80h，發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵液經(jīng)分離純化獲得酒精。

4.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述玉米糖化醪發(fā)酵液按如下方法制得：取玉米粉，加2～3倍質(zhì)量水調(diào)漿，攪拌加熱至50～70℃，加入耐高溫α-淀粉酶10U～30U/g玉米粉，混勻后加熱至80～90℃進行糊化液化，100～110℃保溫0.5～2h；糊化醪冷卻至50～70℃，加入糖化酶100U～300U/g玉米粉，55～60℃糖化0.5～1.0h，即得所述玉米糖化醪發(fā)酵液。

5.一種集成基因代謝工程和全基因組重排構(gòu)建工業(yè)釀酒酵母工程菌的方法，所述方法包括：

(1)誘導釀酒酵母菌株產(chǎn)孢，分離純化單倍體菌株，鑒定單倍體菌株交配型，選取交配型a的單倍體菌株Y1和交配型α的單倍體菌株Y2作為出發(fā)菌株；

(2)然后分別敲除菌株Y1和菌株Y2的編碼甘油轉(zhuǎn)運蛋白的基因FPS1，并在FPS1位點整合表達變鏈球菌(Streptococcus?mutans)的3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPN)，對單倍體Y1和Y2分別采用G418^r和Zeo^r抗性標記篩選，獲得單倍體基因工程菌株：G418^r抗性菌株YFG1和Zeo^r抗性菌株YFG2；

(3)分別使用紫外和EMS對菌株YFG1和菌株YFG2進行誘變，獲得四個突變庫：YFG1紫外誘變庫、YFG1EMS誘變庫、YFG2紫外誘變庫和YFG2EMS誘變庫；

(4)以體積濃度8％的乙醇YPD平板篩選生長迅速的單菌落進行第一輪全基因組重排，用含300μg/mL?G418和50μg/mL?Zeocin的YPD平板篩選重排子，誘導重排子產(chǎn)孢破壁后，用體積濃度12％的乙醇YPD平板篩選生長迅速的單菌落進行第二輪全基因組重排，用含300μg/mLG418和50μg/mL?Zeocin的YPD平板篩選重排子，通過模擬工業(yè)原料的濃醪發(fā)酵測試，獲得低副產(chǎn)物合成、高糖醇轉(zhuǎn)化率和高乙醇產(chǎn)量的工業(yè)釀酒酵母工程菌株。