[發明專利]用釀酒酵母測定直接染料急性毒性的方法

無效

• 申請號: 201110286244.7
• 申請日: 2011-09-25
• 公開（公告）號: CN102344948A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 譚之楊
• 申請（專利權）人: 武漢紡織大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及紡織品安全與染料生產領域，是一種評價直接染料對生物細胞急性毒性的方法。?

背景技術

直接染料對纖維有較強的親和力，無須媒染劑的幫助就可以上染纖維素纖維，因此在纖維素纖維用染料中占較大的數量，這類染料分子中都含有磺酸基或羧基，商品制成鈉鹽，因此可溶于水。直接染料的結構具有線型、共平面性、較長共軛系統的特點，化學結構上主要是雙偶氮、三偶氮等具有磺酸基的多偶氮染料。主要用于棉紗、針織物、粘膠纖維和絲綢等產品的染色，也用于毛皮和紙張的染色。?

多數直接染料的原料為芳香胺，芳香胺是一類致癌物質。因此，在德國首批禁用染料中，直接染料占了很大的比重，其中以聯苯胺、二甲基聯苯胺等三類衍生物作為中間體合成的直接染料占全部被禁用的直接染料的90%以上。?

目前的直接染料檢測方法中規定使用的主要儀器是氣質聯用儀，目前全部依靠進口，每臺氣質聯用儀折合人民幣在80萬元左右，每臺設備一天最多只能檢驗30份樣品，同時在檢測處理過程中要使用大量高純度試劑和進口提取柱等材料，費用相當高。多數地市級檢測機構都沒有能力購置配備這一檢測設備，也就無法開展相應的檢驗工作，這制約了我國直接染料檢測的覆蓋范圍。?

而傳統的急性毒性測試一般需要設置5-7個劑量組，同時規定每個劑量組的小鼠、裸鼠或豚鼠的數目不少于10只；大鼠、新西蘭兔的數目為6-8只；家兔、犬等的數目為4-6只，根據24?h的死亡率和14天內的總死亡數計算速死性化合物求其LD₅₀(LC₅₀)，并需要詳細觀察動物中毒癥狀的發生和發展過程，死前癥狀、死亡時間、體重變化、出汗流涎，血性分泌物、瞳孔改變、器官有無充血、出血、水腫或其它改變。?

傳統急性毒性測定過程的復雜性、高成本、高耗時以及殘留的動物尸體對環境的二次污染等問題迫使人們嘗試開發魚類毒性測試、蚤類毒性測試、四膜蟲毒性測試、藻類毒性測試、發光細菌毒性測試和生物傳感器測試方法。?

魚類毒性測試方法：魚類毒性實驗采用24?h，48?h，96?h測定有毒物質的LC₅₀，適用于水中單一物質的毒性測定，但靜水法、換水法和流水法測定結果不一致，同時需要大量實驗材料和多次重復實驗。?

蚤類毒性測試方法：蚤類是國際上普遍采用的實驗生物。采用死亡率、捕食行為改變為指標。但標準不易統一。?

四膜蟲毒性測試方法：采用單細胞凝膠電泳技術(SCGE)和流式細胞術聯合檢測四膜蟲(Tetrahymena?thermophila)的彗尾長度、拖尾率、細胞損傷率、DNA損傷以及DNA相對熒光強度，從DNA損傷角度探討工業廢水中常見的含氮雜環化合物對四膜蟲的毒性作用。但該法所測試的毒性種類有限，很難用于染料及其印染廢水毒性測試。?

藻類毒性測試方法：用斜生柵藻、小球藻、鹽澤螺旋藻、扁藻等的生長抑制作為測試指標測定被檢測物的急性毒性，也有將細菌熒光酶基因轉入絲狀體固氮藍藻-魚腥藻中，利用其作為報告基因，通過對發光強度的測定來檢測被測物的急性毒性。但是工作量大，測定周期長，而且不適用于染料。?

發光細菌毒性測試方法：美國Backman公司研制了一種商品名為Microtox的生物發光光度計(即生物毒性測定儀)，其中明亮發光桿菌發光強度的變化檢測污染物的毒性的靈敏度與魚類96?h急性毒性實驗相當。我國于1995年將這一方法列為水質急性毒性檢測的標準方法。青海孤菌(Vibrio?qinghaiensis?sp.?nov.)也用于淡水樣品的生物毒性檢測。硝化細菌也用于有毒物質的毒性檢測。英國PPM公司研發了一種名為AMTOX的在線測試儀，該儀器基于固定化硝化細菌消耗樣品中的氨，并通過測定底物中氨氮的消耗速率來檢測樣品的毒性。但是，發光細菌法檢測毒性具有發光強度本底值差異較大，檢測期間發光變化幅度寬的問題，所測得的數據不準確。同時，由于許多染料本身是熒光淬滅劑，不適于該法。?

生物傳感器測試方法：用于毒性檢測的生物傳感器有酶傳感器、微生物傳感器、DNA傳感器和免疫傳感器等。但是，酶、DNA和抗原-抗體的專一性強，因此，一種生物傳感器只能特異地檢測一種物質的毒性。?

發明內容