[發(fā)明專利]納豆芽孢桿菌NT-6菌株生產的復合抗菌肽及其生產方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110283013.0
• 申請日: 2011-09-22
• 公開（公告）號: CN102321182A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設計）人: 孫力軍;王雅玲;劉喚明;徐德峰;聶芳紅
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12P21/00;A23L3/3526;A23K1/17;A01N63/02;A01P1/00;A01P3/00;A61K38/02;A61P31/00;C12R1/07
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 劉廣生

技術領域

本發(fā)明涉及一種納豆芽孢桿菌NT-6菌株生產的復合抗菌肽及其方法，屬于生物技術領域。該方法生產的抗菌脂肽具有廣譜的抗菌活性和生物表面活性，在醫(yī)藥、農業(yè)、食品和環(huán)境治理等領域有廣泛的應用前景。

背景技術

細菌性豆豉(在日本稱為納豆)在中國是一種非常普遍的富含風味物質的大豆發(fā)酵食品，已有2000多年的歷史。其發(fā)酵菌株是納豆芽孢桿菌（Bacillus?natto）。納豆芽孢桿菌能產生許多功能因子，使發(fā)酵產品對人體具有許多有益功能。目前，國內外針對納豆菌的研究，主要集中在具有溶栓作用的代謝產物納豆激酶。而其產生的抗菌作用，近些年來才受到人們重視。據文獻報道，納豆菌對細菌、酵母菌和霉菌均具有一定的抗菌活性，具有抑制沙門氏菌、傷寒菌、痢疾菌及大腸桿菌等致病菌的作用，其抗菌譜較廣，而且具有一定的耐熱性（鐘青萍等，食品科學，2002，23（10）：109-?112）。盡管對納豆菌的抗菌性已有一些研究報道，但對其產生的抗菌物質多沒有明確的研究報告。有研究者認為產生的抗菌物質是2，6-?吡啶羧酸，也有人認為是多粘菌素或桿菌肽或抗菌蛋白，但沒有鑒定的資料（紀寧等，食品研究與開發(fā)，?2006，?27?(1):?138-142）；曹小紅等對Bacillus?natto?TK-1菌株產生的抗菌物質進行了研究，發(fā)現(xiàn)了一種有抗菌活性的分子量為1036Da的脂肪酸鏈上有15個碳的環(huán)狀脂肽surfactin（曹小紅等，中國生物工程志，2009，?29(2):54-58）。除此之外未見其它相關納豆菌抗菌物質的鑒定文獻，特別是未見一種菌株同時產生二十多種抗菌脂肽同系物的文獻報道。

抗菌脂肽具有生物表面活性和廣譜的抗菌活性，對細菌、真菌、原蟲和癌細胞具有很強的殺傷作用，在醫(yī)藥、農業(yè)、食品及化妝品、石油開采和環(huán)境治理等領域有重要的應用前景。特別是由于抗菌脂肽具有無毒、無殘留、不產生耐藥性的特點，符合當今綠色安全食品生產的要求，在食品防腐、飼料添加劑、動物防病和農業(yè)生物防治等領域受到廣泛的關注。

發(fā)明內容

本發(fā)明的主要目的是利用納豆芽孢桿菌(Bacillus?natto)?通過深層發(fā)酵或固態(tài)發(fā)酵及下游工藝生產一種復合抗菌脂肽，此抗菌肽具有廣譜的抗菌活性、pH適應范圍廣、耐熱性能好、安全，可作為食品防腐劑、飼料添加劑、農用生物防治劑、動物防病劑和環(huán)境治理劑等。

為了解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術方案是：

1.?本發(fā)明利用納豆芽孢桿菌(Bacillus?natto)?NT-6菌株產生的抗菌肽，特征如下：

該抗菌肽主要含有三組抗菌物質，它們的分子量分別為：一組：10432、1057.2、1071.0、1071.0；二組：1491.7、1492.5、1505.7、1519.7；三組：994.3、1009.0、1008.8、1009.9、1008.7、1022.7、1022.6、1036.8、1036.5、1036.6、1051.8、1050.6、1051.2、1051.6、1065.8、1080.2（LC-MS圖譜見附圖1）。該抗菌肽為抗菌脂肽類物質，由一系列同系物組成，第一組物質為iturin系列，第二組物質為fengycin系列，第三組為surfactin系列；它們的比例分別是10~20%、25~35%和50~60%；純品為黃色粘稠物；在水中溶解性好；能耐受100℃30min的加熱；在pH?2-12活性不喪失；耐受木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的水解；口服具有較高安全性；有廣譜的抗菌活性，它對食源性致病菌，如金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、溶血鏈球菌和小腸結腸炎耶爾森氏菌、大腸桿菌O157、單增李斯特氏菌、沙門氏菌等具有很好的抑制作用；對食品腐敗細菌，如藤黃微球菌、大腸埃希氏桿菌、普通變形桿菌、蠟樣芽孢桿菌、熒光假單胞菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌、腸膜明串珠菌等，食品腐敗霉菌，如黑曲霉、米曲霉、少根根霉、青霉、鐮孢菌、黃曲霉等抑制作用較好；對許多植物致病菌，如擴展青霉、點青霉、稻瘟病菌、水稻紋枯病、小麥紋枯病菌、八角炭疽病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌等顯示了很強的抑制作用；對動物致病菌，如豬腸炎沙門氏菌、溶血性大腸桿菌、嗜水氣單胞菌、溶藻弧菌、副溶血性弧菌、霍亂弧菌、水霉、鰓霉、鏈弧菌等也有較好的抑制作用。

2.?本發(fā)明生產上述復合抗菌肽是通過以下方法實現(xiàn)的:：

該方法采用的生產菌株為納豆芽孢桿菌Bacillus?natto?NT-6菌株，16SrRNA?基因序列?GenBank?登錄號為JN180628；