[發明專利]納豆芽孢桿菌NT-6菌株生產的復合抗菌肽及其生產方法

無效

• 申請號: 201110283013.0
• 申請日: 2011-09-22
• 公開（公告）號: CN102321182A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 孫力軍;王雅玲;劉喚明;徐德峰;聶芳紅
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12P21/00;A23L3/3526;A23K1/17;A01N63/02;A01P1/00;A01P3/00;A61K38/02;A61P31/00;C12R1/07
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 劉廣生

1.納豆芽孢桿菌NT-6菌株生產的復合抗菌肽，其特征在于：該復合抗菌肽是由iturins、fengycins和surfactins三類抗菌脂肽同系物的混合物組成，它們的比例分別是10~20%、25~35%和50~60%；其中iturins同系物分子量分別為：10432、1057.2、1071.0、1071.0；Fengycins同系物分子量分別為：1491.7、1492.5、1505.7、1519.7；Surfactins同系物分子量分別為：994.3、1009.0、1008.8、1009.9、1008.7、1022.7、1022.6、1036.8、1036.5、1036.6、1051.8、1050.6、1051.2、1051.6、1065.8、1080.2道爾頓（Da），該復合抗菌肽為黃色粘稠物，水溶性好；能耐受100℃?30min的加熱；在pH?2~12活性不喪失；耐受木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的水解；口服具有較高安全性；能抑制多種革蘭氏陽性、陰性致病或腐敗細菌，尤其對霉菌具有良好的抑制作用。

2.納豆芽孢桿菌NT-6菌株生產的復合抗菌肽的生產方法，其特征在于:?該方法采用的生產菌株為納豆芽孢桿菌Bacillus?natto?NT-6菌株，16SrRNA?基因序列?GenBank?登錄號為JN180628；

所用培養基的組成為：?

1）種子培養基(g/L):?胰蛋白胨8.0~12.0g，?酵母膏3.0~8.0g，?NaCl?3.0~7.0g，水1000mL，pH7.0~7.5；

2)?液體發酵培養基：培養基-1:?葡萄糖8.0~12.0g，谷氨酸鈉3.0~7.0g，MgSO_4?0.3~0.7g，?KCl?0.3~0.7g，KH₂PO_4?0.8~1.2g，FeSO_4?0.10~0.20mg，MnSO_4??3.0~7.0mg，CuSO_4?0.15~0.18mg，水1000mL，pH6.5~7.0；或培養基-2:?葡萄糖8~12g，土豆80~120g，水1000mL；

3）固體發酵培養基：稻殼或甘蔗渣50~80g，?麩皮15~25g，谷氨酸鈉3~7g，?葡萄糖3~7g，水150mL；

方法一：將納豆芽孢桿菌(Bacillus?natto)NT-6菌株通過種子培養基進行種子的擴大培養，接種量為種子培養基體積的2%，28～35℃，在液體發酵培養基中進行液體深層發酵30～48?h，發酵液經離心去除菌體，然后在上清液中加入HCl?調整pH到2，靜置后離心，沉淀用甲醇或乙醇進一步提取，提取物經賦型劑吸附、干燥，得抗菌肽成品；

方法二：將納豆芽孢桿菌(Bacillus?natto)NT-6菌株通過種子培養基進行種子的擴大培養，接種量為種子培養基體積的2%，28～35℃，在液體發酵培養基中進行液體深層發酵30～48?h，發酵液經離心去除菌體，然后將上清液濃縮，經甲醇或乙醇提取后，濃縮干燥，經賦型劑吸附、得抗菌肽成品；

方法三：將納豆芽孢桿菌(Bacillus?natto)NT-6菌株通過種子培養基進行種子的擴大培養，接種量為種子培養基體積的2%，28～35℃，在液體培養基中進行液體深層發酵30～48?h，發酵液經離心去除菌體，然后將上清液濃縮，賦型劑吸附、干燥，得抗菌肽成品；

方法四：將納豆芽孢桿菌(Bacillus?natto)NT-6菌株通過種子培養基進行種子的擴大培養，將5-10%接種于固體發酵培養基，在28～37℃的條件下培養2～4天后，再經甲醇或乙醇提取后，干燥，賦型劑吸附，混勻，得抗菌肽成品；或發酵后直接干燥，粉碎，得抗菌肽成品。

3.根據權利要求1所述的納豆芽孢桿菌NT-6菌株生產的復合抗菌肽，其特征在于：所述的復合抗菌肽在食品防腐、飼料添加劑、醫藥和農用生物防治等方面的應用。