[發明專利]ABO、RhD血型定型檢測卡的制備方法

無效

• 申請號: 201110281800.1
• 申請日: 2011-09-21
• 公開（公告）號: CN102435756A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 陳維佳;王冬倩;趙繼巖;賈天冰;萬俊波;郭廣英;馮立崗;陳云聲;楊洪存;楊明;李凌波;劉春光;李秋生;莊賈明;孫啟和
• 申請（專利權）人: 長春博迅生物技術有限責任公司
• 主分類號: G01N33/80
• 分類號: G01N33/80;G01N33/531
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

技術領域

本發明提供一種ABO、RhD血型定型檢測卡的制備方法，是對現有制備方法的改進，屬于醫學檢測技術領域。

背景技術

人類紅細胞血型是同種異型抗原，是人類遺傳多態性標志之一。輸血前血型定型和交叉配血是人類安全輸血的保證，血型相容性檢測是確保安全輸血的最重要條件之一。

Rh血型系統是僅次于ABO血型系統的重要血型系統，也是紅細胞血型系統中最為復雜的一個系統，目前國際輸血協會（ISBT）已確認的Rh血型抗原有48個。其中D、C、c、E、e五種抗原抗原性最強，而D抗原抗原性又最強。由于RhD血型不合所引起的輸血反應最為常見。

微柱凝膠免疫檢測技術是20世紀90年代產生的一種免疫檢測技術，其基本原理是利用分子篩技術，離心技術和特異性免疫反應技術原理，把血型血清學技術與凝膠分子篩技術有機結合起來，可靈敏地檢測出可能存在的微弱血型抗原抗體反應，被認為是血型血清學檢驗的里程碑。

目前已有類似方法提出申請（申請號為200910234608.X），但是與本發明相比，其制備工藝不同，選用凝膠不同，并且在處理凝膠過程中本發明采用生理鹽水進行處理，既能夠達到是凝膠充分膨脹的作用，又能夠節約生產成本。此外，在特異性抗體的選擇配置過程中，本發明采用比較合理的溶液配比能夠達到較好的檢測結果。

發明內容

本發明提供一種ABO、RhD血型定型檢測卡，具有靈敏度高、特異性好、質量穩定、易于操作、易于標準化、能同時進行正反定型的ABO、RhD血型定型。

本發明還提供了上述檢測卡的制備方法，適用于工業化生產。

本發明提供一種ABO、RhD血型定型檢測卡，具有以下結構：

一種ABO、RhD血型定型檢測卡，其特征在于：

第一個微管中灌注抗A單克隆抗體微柱凝膠；

第二個微管中灌注抗B單克隆抗體微柱凝膠；

第三個微管中灌注抗D單克隆抗體微柱凝膠；

第四至第六個微管中灌注中性膠；

第四個微管作為陰性對照；

第五、第六微管作為反定型。

本發明所述ABO、RhD血型定型檢測卡的制備方法，包括以下步驟：

凝膠制備

將葡聚糖凝膠干粉用3～5倍體積的生理鹽水凝膠懸浮溶液浸泡24～48小時，待凝膠充分膨脹后，用凝膠懸浮溶液洗滌5次，然后再用蒸餾水洗滌5次，除去凝膠破損碎片和聚集的凝膠顆粒以及凝膠中過多的鹽離子；收集得到顆粒大小均勻的、且完整呈球形凝膠顆粒；選用生理鹽水進行凝膠的制備具有如下優點：

1.既能夠達到是凝膠充分膨脹的作用，又能夠節約生產成本；

2.浸泡24～48小時，能夠使得凝膠充分溶脹，使得凝膠的膨脹率達到最佳，并減少凝膠的損失。

特異性抗體配制

取甘氨酸1.5×10^-3?g/ml、氯化鈉0.85×10^-3?g/ml、磷酸二氫鈉2.4×10^-3?g/ml、磷酸二氫鈉4.8×10^-3?g/ml、牛血清白蛋白0.5～1%（每100ml特異性抗體溶液中含有0.5～1g牛血清白蛋白），以上試劑用蒸餾水溶解后，調PH為6.6～6.8，然后將其與抗A單克隆抗體混合，使得抗A單克隆抗體效價≥128；

同樣配方配制抗B單克隆抗體、抗D溶液單克隆抗體，使得抗B單克隆抗體效價≥128，抗D單克隆抗體效價≥128；

本發明配方進行抗體配置具有如下優點：

在節約生產成本的基礎之上，能夠使得抗體溶液達到最佳的反應條件，并且能夠最大限度的保護抗體，使得抗體效價在1～2年內，仍然抗A?效價≥128，抗B?效價≥128，抗D?效價≥128。

特異性凝膠配制

分別取抗A單克隆抗體、抗B單克隆抗體和抗D單克隆抗體與已溶脹的葡聚糖凝膠按照1:1～6:1比例混合，間斷攪拌均勻25～35分鐘，即為半成品特異性膠；

中性膠配制：用生理氯化鈉溶液與溶脹葡聚糖凝膠按照1:1～6:1混合，間斷攪拌均勻1～2小時，即得半成品的中性膠；

本發明特異性凝膠配置，抗A、抗B和抗D特異性凝膠采用間斷均勻25～35分鐘，中性膠采用間斷攪拌均勻1～2小時，能夠使得抗體溶液與凝膠充分混勻，這樣更加有利于檢測時抗原抗體的充分反應，使得檢測結果更加準確可信。