[發(fā)明專利]一種利用RAPD快速區(qū)分葡萄品種的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110278546.X | 申請日： | 2011-09-19 |
| 公開（公告）號： | CN102277444A | 公開（公告）日： | 2011-12-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 房經(jīng)貴;劉崇懷;王晨;上官凌飛;宋長年;吳偉民 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京農(nóng)業(yè)大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 210095 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 rapd 快速 區(qū)分 葡萄 品種 方法 | ||
1.一種利用RAPD快速區(qū)分葡萄品種的方法，其特征在于包括如下步驟：
(1)針對葡萄的基因序列設(shè)計RAPD隨機引物，篩選得到穩(wěn)定性和多態(tài)性高的隨機引物，并確定退火溫度；
(2)利用步驟(1)得到的隨機引物對未知葡萄品種進行PCR擴增，根據(jù)特異性譜帶構(gòu)建相應被區(qū)分品種的圖譜關(guān)系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用RAPD快速區(qū)分葡萄品種的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的隨機引物由11個堿基組成，隨機引物篩選通過連續(xù)兩次梯度PCR選擇條帶一致的溫度作為退火溫度。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用RAPD快速區(qū)分葡萄品種的方法，其特征在于：所述步驟(2)中構(gòu)建圖譜關(guān)系，根據(jù)引物擴增出的譜帶，單獨具有多態(tài)性譜帶的品種被區(qū)別出來，其余品種根據(jù)譜帶表現(xiàn)進行分組，再通過其他引物區(qū)別、分組，直到所有品種被鑒別。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種利用RAPD快速區(qū)分葡萄品種的方法，其特征在于：所述隨機引物及對應退火溫度為：
S1+C?????5’-GTTTCGCTCCC-3’???45.1℃；
S10+A????5’-CTGCTGGGACA-3’???43.6℃；
S10+T????5’-CTGCTGGGACT-3’???39.3℃；
S10+G????5’-CTGCTGGGACG-3’???42.1℃；
S42+G????5’-GGACCCAACCG-3’???45.1℃；
S48+T????5’-GTGTGCCCCAT-3’???44.6℃；
S1+A????5’-GTTTCGCTCCA-3’????45.1℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用RAPD快速區(qū)分葡萄品種的方法，其特征在于：所述步驟(2)中的PCR擴增為30μl的反應體系，包括10×PCR?Buffer?3μl，2.5mmol/L?dNTPs2.4μl，25mmol/LMgCl2?1.8μl，1.25UTaq酶，隨機引物10pmol/μl?1.2μl，模板DNA40～50ng。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用RAPD快速區(qū)分葡萄品種的方法，其特征在于：所述步驟(2)中PCR擴增反應95℃預變性3min，94℃變性30s，復性1min，72℃延伸2min，42個循環(huán)，72℃延伸10min。
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