[發明專利]一種丙型肝炎病毒核心抗原及其抗體以及分泌該抗體的雜交瘤細胞株

有效

• 申請號: 201110272789.2
• 申請日: 2011-09-15
• 公開（公告）號: CN102329378A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 王傳新;王麗麗;王順
• 申請（專利權）人: 山東大學齊魯醫院
• 主分類號: C07K14/18
• 分類號: C07K14/18;C07K16/10;C12N15/51;C12N5/20;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術領域

本發明涉及一種針對我國丙型肝炎病毒感染流行株的核心抗原，以及對該抗原具有特異性的抗體，以及能夠分泌產生該抗體的雜交瘤細胞株。?

背景技術

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitis?C?virus，HCV)感染引起的傳染病，已經成為繼乙肝、艾滋病后又一種引起全球性關注的病毒性傳染病。目前，全世界丙型肝炎病毒攜帶者約有1.7億人，且以300～400萬人/年的速度遞增；我國受感染者在6,000萬人以上，平均感染率為3.2％，屬中高流行區域，HCV基因型以1b和2a為主，其中1b型占到70％以上。?

HCV感染易慢性轉化，80-85％HCV感染者發展為慢性丙型肝炎，其中20％發展為肝纖維化，最終有4-5％肝纖維化患者發生肝細胞性肝癌，是導致肝硬化、肝細胞性肝癌的重要因素。一些數據顯示，未來20年內與HCV感染相關的死亡率將繼續增加。及早對HCV感染者進行診斷并給予正確治療是減緩疾病進展、降低死亡率的關鍵。由于HCV高度變異且機體免疫與HCV感染的復雜機理使丙型肝炎疫苗的研制困難重重，短期內難有突破性進展。雖然干擾素對慢性丙型肝炎有一定療效，但療程長、價格昂貴、毒副作用大且易反彈。目前國內主要應用血清學的抗HCV/EIA檢測抗體，由于窗口期的存在，經抗體篩選后，臨床上仍有部分輸血后丙肝發生。HCV病毒學的檢測操作復雜、容易污染，價格昂貴，很難用于大規模篩查。建立高靈敏度、特異性和穩定性的HCV抗原早期檢測方法，縮短檢測窗口期，可有效防止傳播，而獲得高特異性的單克隆抗體又是其中的關鍵。丙型肝炎病毒基因組兩端的非編碼區及編碼核心蛋白的區域是HCV基因組中最保守的區域。其N端前120個氨基酸構成了主要的親水結構域，具有很強的免疫原性。該區氨基酸序列保守，含有多個線性表位，不同病毒分離株的氨基酸約90％同源。高度保守的HCV核心蛋白是HCV早期診斷必不可少的抗原之一。制備針對我國HCV流行株的特異性鼠單克隆抗體，對丙型肝炎病毒核心抗原檢測方法的建立具有重要意義和應用價值。?

采用鼠-鼠雜交瘤技術制備的單克隆抗體至今仍是診斷試劑的重要來源之一，技術較為成熟，因其特異性強，能夠減少可能的交叉反應，從而可以提供較準確的檢驗結果，均一性和生物活性單一性的優點也利于進行標準化和規范化的質量管理。?

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種針對我國丙型肝炎病毒感染流行株的核心抗原，?以及對該抗原具有特異性的抗體，以及能夠分泌產生該抗體的雜交瘤細胞株(兩株)，本發明提供的單克隆抗體，能夠高特異性地結合HCV核心抗原，具有較高的親和力，可用于我國人群HCV早期診斷核心抗原檢測試劑盒的研制。?

本發明是通過以下技術方案實現的：?

一種丙型肝炎病毒核心抗原，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，是由核苷酸序列為SEQID?NO.2所示的DNA編碼的多肽。?

一株分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞株為SC16-H6，命名為鼠-鼠雜交瘤細胞，已于2011年07月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.5074。?

另一株分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞株為SC23-G5，命名為鼠-鼠雜交瘤細胞，已于2011年07月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.5075。?

所述雜交瘤細胞株是由免疫的Balb/c小鼠脾細胞和鼠骨髓瘤細胞SP2/0經融合、篩選、克隆、傳代和反復凍存、復蘇后獲得的小鼠雜交瘤細胞系，能穩定分泌單克隆抗體。?

一種抗丙型肝炎病毒核心抗原的單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCC?No.5074的雜交瘤細胞株或保藏編號為CGMCC?No.5075的雜交瘤細胞株分泌產生的，其對SEQ?ID?NO.1所示的多肽具有特異性。?

一種制備所述單克隆抗體的方法，包括：用SEQ?ID?NO.1所示的多肽免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾臟細胞與骨髓瘤細胞融合，篩選出能夠分泌對SEQ?ID?NO.1所示的多肽具有特異性的單克隆抗體的雜交瘤細胞，從雜交瘤細胞上清液中或從注射雜交瘤細胞的動物腹水中，獲得所述單克隆抗體。?