[發明專利]尿液中尿酸檢測免疫膠體金試紙條及制造方法

無效

• 申請號: 201110270133.7
• 申請日: 2011-09-14
• 公開（公告）號: CN102998443A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 邱洪斌;張強;沙靖全;高志剛;關寶生
• 申請（專利權）人: 佳木斯大學
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;G01N33/531
• 代理公司: 北京神州華茂知識產權代理有限公司 11358
• 代理人: 吳照幸

技術領域

本發明設計一種免疫膠體金試紙條，用于檢測尿液中尿酸的含量。

背景技術

隨著社會的進步，人們對其自身健康水平日益關注。生物分子尿酸是人體內嘌呤代謝的最終產物，分子式為C₅H₁₄N₄O₃，MW?168.11，不溶于水，也難溶于酸。尿酸是一種含有嘌呤結構的化合物，也是嘌呤的最重要衍生物。尿酸含量與體內核酸的分解代謝速度、腎的排泄功能和食物中核酸的含量有關，血或尿中尿酸含量的升高可作為診斷痛風病、慢性白血病、多發性骨髓瘤、腎功能減退和由于中毒而產生的肝臟疾病等的主要指標。因此，近年來尿酸的檢測和分析在疾病的臨床診斷和治療方面的應用日益廣泛。

目前已報道的尿酸測定方法重量法、滴定法、還原法和酶法等。重量法和滴定法操作繁瑣，而且準確度低，不適于尿酸的精確測定。臨床上通常采用還原法和酶比色法。還原法的檢測原理是，尿酸在堿性條件下被磷鎢酸氧化成尿素，磷鎢酸被還原成鎢藍，其生成量與尿酸含量成正比。此法的檢測缺點是，血樣中的抗壞血酸易干擾檢測效果，樣品必須事先進行脫蛋白處理，需要昂貴設備和專業分析人員。酶法常用于醫院的自動生化分析儀，適于大批量試樣的分析作業，但是血液分析前經離心分離為血清或血漿，要求專業人員和專門的試劑，不適于家庭中使用。此外，這些方法絕大多數屬血尿酸檢測方法，病人樣本采集有疼痛且有感染危險。

技術方案

針對上述尿酸檢測技術的發展和應用現狀，本發明基于抗體識別和納米尺寸效應的免疫膠體金技術，結合試紙的廉價和便捷優勢，建立一種能夠便捷直觀地測定尿液中尿酸含量的免疫膠體金速測試紙條。此試紙條無需儀器設備和專業操作人員，避免了取血的痛苦和可能的感染危險，檢測快速現象直觀，是一種非常適合病人家庭和小型醫療機構使用的高效尿液尿酸檢測方法。

本發明采用以下技術方案：

一種檢測尿液中尿酸的免疫膠體金試紙，包括背板及硝酸纖維素膜，尿酸-OVA抗原作為試紙檢測線T線，羊抗兔抗體作為試紙質控線C線，C線與T線均噴涂于硝酸纖維素膜上，并在硝酸纖維素膜的T線側疊加粘貼膠體金標墊，膠體金標墊和硝酸纖維素膜的C線側分別疊加粘貼樣品墊和吸收墊。

所述的膠體金標墊由特異識別尿酸的兔源抗體所修飾。

硝酸纖維素膜、膠體金墊、樣品墊及吸收墊，依次粘貼在涂有膠層的白色塑料背板上，壓緊后切割成條狀。

所述試紙可直接用于尿液中尿酸的檢測。

所述試紙的制備方法，包括以下步驟：

(1)通過尿酸半抗原與牛血清白蛋白BSA偶聯，獲得尿酸-BSA人工抗原；

(2)將尿酸-BSA人工抗原免疫兔子，免疫后取兔血獲得抗血清并純化抗體，通過競爭ELISA法檢測抗體對尿酸分子的特異性，得到尿酸抗體；

(3)利用膠體金標記上述尿酸抗體，制備膠體金抗體探針液，通過浸泡玻璃棉膜，得到膠體金墊；

(4)將尿酸-OVA包被抗原和羊抗兔抗體，分別噴涂于硝酸纖維素膜上；

(5)將硝酸纖維素膜、膠體金墊、樣品墊以及吸收墊，依次粘貼在涂有膠層的白色塑料背板上，壓緊后切割成條狀。

本發明優選以下技術方案：尿酸免疫膠體金速測試紙條(圖1)，是在一塊涂有膠層的塑料背板上粘貼噴有尿酸-OVA(雞卵清蛋白)包被抗原(T線)和羊抗兔抗體(C線)的硝酸纖維素膜，并在硝酸纖維素膜的T線側疊加粘貼特異識別尿酸兔源抗體修飾的膠體金墊，膠體金墊和硝酸纖維素膜的C線側分別疊加粘貼樣品墊和吸收墊，切割成條狀。

尿液中尿酸免疫膠體金速測試紙條制造方法的全過程包括以下步驟：

1)采檸檬酸鹽還原法制備膠體金顆粒，顆粒直徑為15±3.5nm；

2)將尿酸半抗原通過水溶性碳化二亞胺(EDC)法將尿酸分子與牛血清白蛋白(BSA)偶聯，獲得尿酸-BSA人工抗原；所述的尿酸半抗原的特征是，在尿酸分子中一個羥基位點添加一個戊酸的改造分子；

3)將尿酸-BSA人工抗原免疫雄性新西蘭大白兔，免疫后取兔血獲得抗血清并純化抗體，通過競爭ELISA法檢測抗體對尿酸分子的特異性；

4)1.3mg尿酸抗體與50mL膠體金溶液混合，制備膠體金抗體探針。將玻璃棉膜浸泡與此探針溶液中，37℃干燥，得到膠體金墊；

5)采用單向噴點儀將尿酸-OVA包被抗原和羊抗兔抗體，噴在硝酸纖維素膜上，37℃干燥；

6)將硝酸纖維素膜、膠體金墊、樣品墊以及吸收墊，依次粘貼在涂有膠層的白色塑料背板上，壓緊后切割成條狀。

附圖說明