[發明專利]從酵母中制備的小分子雙鏈核糖核酸群及制備方法和用途

有效

• 申請號: 201110267333.7
• 申請日: 2011-09-09
• 公開（公告）號: CN102321625A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 朱遠源
• 申請（專利權）人: 朱遠源
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12P19/34;A61K48/00;A61K31/713;A61P35/00;A61P31/12
• 代理公司: 南通市永通專利事務所 32100
• 代理人: 葛雷

技術領域

本發明涉及一種從酵母中制備的小分子雙鏈核糖核酸群的制備方法及用途。

背景技術

Toll樣受體(Toll-like?receptors，TLR)是參與非特異性免疫(天然免疫)的一類重要蛋白質分子，也是連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁。TLR是單個的跨膜非催化性蛋白質，可以識別來源于微生物的具有保守結構的分子。當微生物突破機體的物理屏障，如皮膚、粘膜等時，TLR可以識別它們并激活機體產生免疫細胞應答。

目前，在哺乳動物及人類中已經發現的人TIRs家族成員有11個。根據染色體的位置、基因結構和氨基酸序列，人的TLRs受體可以分為5個亞科，即TLR2，TLR3，TLR4，TLR5和TLR9。TLR2亞科有TLR1，TLR2，TLR6和TLR10；TLR9亞科有TLR7，TLR8和TLR9；TLR3，TLR4和TLR5各自形成一個亞科。

TLR如同天然免疫的眼睛，監視與識別各種不同的疾病相關分子模式(PAMP)，是機體抵抗感染性疾病的第一道屏障。其中TLR4可以識別革蘭氏陰性菌脂多糖(LPS)，還可識別宿主壞死細胞釋放的熱休克蛋白(heatshockproteins，HSP)，體內類肝素硫酸鹽和透明質酸鹽降解的多糖部分以及局部的內源性酶的級聯活化反應也可激活TLR4。TLR2的配體較TLR4的廣泛，包括脂蛋白，脂多肽，脂壁酸(LTA)阿拉伯甘聚糖(LAM)及酵母多糖等。TLR5可以識別鞭毛蛋白，鞭毛蛋白是目前發現的TLR5的惟一配體。具有鞭毛蛋白的L型細菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌和鼠傷寒沙門菌等可被TLR5識別。TLR7識別咪喹啉家族低分子量的咪唑莫特、R848和R847等。TLR9識別細菌的CpGDNA(含有胞嘧啶-鳥嘌呤模體的未甲基化DNA片段，)，激活B細胞和APC的免疫刺激特性。

TLR3特異識別病毒復制的中間產物雙鏈RNA，從而激活NFκB和干擾素IFNβ前體。DoyleSE等證實，抗TLR3單克隆抗體能抑制成纖維細胞IFNβ的產生。ChristopherA等證實TLR3還具有調控鼻病毒對人支氣管細胞感染的能力，這也說明了TLR3在宿主抵抗活病毒中發揮重要的作用。TLR3表達于免疫細胞和某些非免疫細胞如皮膚角質化細胞、纖維母細胞和肺上皮細胞等，近年來發現人腫瘤組織中也有TLR3表達。TLR3配體雙鏈RNA能直接激活自然殺傷細胞，增強抗原特異性CD8+T細胞應答，促進樹突狀細胞的抗原呈遞激活。

雙鏈RNA也能通過激活多條信號轉導途徑，即：誘生干擾素(IFN)、激活雙鏈RNA激活蛋白激酶(PKR)、激活2′，5′A合成酶(2′，5′oligoadenylate?synthetase)、抑制蛋白質合成、刺激前列腺素E的合成、促進白細胞的分化、促進巨噬細胞、NK細胞及特異性細胞毒T淋巴細胞的活性，誘導抗原呈遞細胞產生各種細胞因子，抑制化學致突變劑的作用，恢復細胞間的接觸抑制等。

從腫瘤生長和轉移的的內環境而言，均依賴于豐富的血管形成，血管內皮細胞生長因子(vascular?endothelial?growth?factor，VEGF)可以引起腫瘤血管生成，并導致腫瘤組織的快速生長。TLR3配體雙鏈RNA能通過刺激體內干擾素生成，發揮抗腫瘤血管生成的作用，是抑制腫瘤的生成與轉移的另一個重要因素。

雙鏈RNA作為體內干擾素(IFN)誘生劑而言經濟而實惠。從植物、微生物到不同種類的動物，其細胞內的dsRNA組份都具有干擾素誘生活性。目前干擾素已經用于治療許多慢性病毒性疾病和腫瘤，但基本上都是使用基因工程干擾素或從人的細胞組織培養中經誘生、純化而生產的干擾素制品。前者不僅價格昂貴，而且一般只含有單一亞型，抗病毒效果不盡完全；組織細胞培養干擾素價格亦較昂貴，而且經常存在批間差別、外源性污染和純度等問題，這些外源性干擾素反復使用還經常會出現抗干擾素抗體，從而大大降低了干擾素再使用的效果。以天然dsRNA為干擾素誘生劑直接用于機體，在體內誘生的自身干擾素是廣譜的，而且雙鏈RNA是免疫調節劑(immune?modulator)，已經證實雙鏈RNA還可誘生其他一些細胞因子。因此，雙鏈RNA作用于機體以后的生物學活性遠遠超出了單純的干擾素誘生活性，而且自身干擾素在體內不會產生抗體，因此可表現出更好的治療效果。