[發(fā)明專利]一種利用激流式生物反應器懸浮培養(yǎng)動物細胞的工藝過程及控制方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110265840.7
• 申請日: 2011-09-08
• 公開（公告）號: CN102994442A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設計）人: 張秀芹;劉鐵成;張雪亭;王延濤;楊威;李會成
• 申請（專利權）人: 哈藥集團技術中心
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02;C12N5/07;C12P21/00;C12P21/08;C12M3/02;C12M1/38;C12M1/36
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用激流式生物反應器動物細胞生產(chǎn)重組蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1).用激流式生物反應器無血清懸浮培養(yǎng)動物細胞，起始接種細胞密度為0.5×10⁶～4×10⁶cells/ml；根據(jù)細胞密度變化流加基礎培養(yǎng)液進行擴增培養(yǎng)體積，使細胞密度維持在4×10⁶～8×10⁶cells/ml，當培養(yǎng)體積擴大到反應器最大培養(yǎng)體積的1/2～3/4時，開始將溫度下降到30～35℃并流加濃縮培養(yǎng)液進行表達。

(2).培養(yǎng)過程工藝參數(shù)針對不同的細胞株生長代謝需求，通過監(jiān)測細胞密度及活率，細胞溶液中滲透壓，以及葡萄糖、谷氨酰胺、氨、乳酸含量，來控制流加營養(yǎng)物質(zhì)的速率。

(3).蛋白降溫表達過程中細胞由對數(shù)生長期進入平臺期并維持7～21天，其產(chǎn)物濃度逐漸升高，當細胞群體生長處于衰退期且細胞活率在40～80％時，停止培養(yǎng)。

2.根據(jù)權利要求1的方法，其特征在于，此種方法可以用于重組蛋白的生產(chǎn)，包括單克隆抗體和融合蛋白等。

3.根據(jù)權利要求1的方法，其特征在于，其中，使用的反應器為激流式生物反應器是指由控制塔、搖床、罐體、一次性塑料袋組成的反應系統(tǒng)；其特征在于，該反應器系統(tǒng)無氣升、鼓泡或攪拌器裝置，采用搖動的培養(yǎng)方式，使剪切力最小化。使用的反應容器為一次性塑料反應袋，避免罐體清洗、滅菌等工作。

4.根據(jù)權利要求1的方法，其特征在于，所述的細胞包括重組CHO細胞、雜交瘤細胞等適合懸浮培養(yǎng)的動物細胞。

5.根據(jù)權利要求1的方法，其特征在于，其中，培養(yǎng)溫度36～37℃、PH?6.7～7.4、搖床轉(zhuǎn)動速度30～60rpm、溶氧濃度(空氣飽和度)為20～80％；所述控制流加營養(yǎng)物質(zhì)的速率、培養(yǎng)溫度、DO、PH采用細胞反應器控制系統(tǒng)進行在線自動控制。

6.根據(jù)權利要求1的方法，其特征在于，其中，培養(yǎng)過程中定時對細胞密度、活率、滲透壓、葡萄糖、氨、乳酸含量進行監(jiān)測。

7.根據(jù)權利要求1的方法，其特征在于，其中，所述配制流加用于細胞擴增的基礎培養(yǎng)液和流加用于蛋白表達的濃縮培養(yǎng)液采用商品化培養(yǎng)液干粉添加一些營養(yǎng)成分和鹽、大豆水解物、生長因子、重組人胰島素，該培養(yǎng)液不包含任何牛源或豬源成分。

8.根據(jù)權利要求1的方法，其特征在于，其中，所述培養(yǎng)反應器中流加基礎培養(yǎng)液后，細胞密度達到4×10⁶～1×10⁷cells/ml，細胞培養(yǎng)體積可擴增到50～300L，甚至更大體積；培養(yǎng)反應器中結(jié)合流加濃縮表達培養(yǎng)液后，細胞密度可達到8×10⁶～2×10⁷cells/ml。