[發(fā)明專利]中國對蝦家系識別微衛(wèi)星標(biāo)記四重PCR引物與識別方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110258128.4
• 申請日: 2011-09-02
• 公開（公告）號: CN102399776A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王偉繼;阮曉紅;李偉亞
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京中偉智信專利商標(biāo)代理事務(wù)所 11325
• 代理人: 張岱

1.中國對蝦家系識別微衛(wèi)星標(biāo)記四重PCR引物，其特征在于所述引物序列如下：

RS1101正向序列為：5′-CGAGTGGCAGCGAGTCCT-3′，反向序列為：5′-TATTCCCACGCTCTTGTC-3′；

FCKR005正向序列為：5′-CATCGAATCTAAGAGCTGGAAT-3′，反向序列為：5′-TTTGTTTGTGAATAATGTGTGT-3′；

FCKR007正向序列為：5′-CGAAATAAGTTAAATGAAAAAA-3′，反向序列為：5′-CAACATAAGACTCACGAGACAG-3′；

FCKR009正向序列為：5′-GCACGAAAACACATTAGTAGGA-3′，反向序列為：5′-ATATCTGGAATGGCAAAGAGTC-3′。

2.一種中國對蝦微衛(wèi)星標(biāo)記四重PCR家系識別方法，其特征在于包括以下步驟：提取中國對蝦基因組DNA、加入權(quán)利要求1所述的引物，建立PCR反應(yīng)體系，選擇合適的PCR反應(yīng)程序進行擴增，PCR產(chǎn)物經(jīng)常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染檢測方法進行中國對蝦四個微衛(wèi)星位點分析，對中國對蝦不同家系進行區(qū)分或者進行個體間及親子之間的識別和鑒定；

所述的PCR反應(yīng)體系，即四對引物可在同一個PCR反應(yīng)體系中同時擴增的參數(shù)，這些參數(shù)是：10×PCR?Buffer?2.5μl，Buffer內(nèi)含pH8.8濃度為750mM?Tris-HCl、200mM(NH₄)₂SO₄、0.1％Tween20，另有2.0mM?Mg²⁺，0.2mM?dNTP，四對引物正向及反向序列各0.2μM，1.0unit?DNA聚合酶，模板DNA100ng，補充滅菌雙蒸水使PCR反應(yīng)體系達到25μl；

所述的PCR反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性4min，隨后的10個PCR循環(huán)為94℃變性40s、52℃退火1min、72℃延伸40s；緊跟著的4個循環(huán)為94℃變性40s、51℃退火1min、隨后每個循環(huán)的退火溫度降低0.5℃、72℃延伸1min；最后10個循環(huán)為94℃變性40s、49℃退火1min、72℃延伸1min。