[發明專利]乙型肝炎病毒耐藥基因突變的檢測探針、檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201110254277.3
• 申請日: 2011-08-30
• 公開（公告）號: CN102286645A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 潘加奎
• 申請（專利權）人: 解碼（上海）生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所 31251
• 代理人: 郭桂峰

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體涉及與乙型肝炎病毒的核苷類似物治療耐藥性相關的基因突變檢測。

背景技術

乙型肝炎病毒(hepatitis?B?virus，HBV)屬啫肝DNA病毒科，基因組長約3.2Kb，為部分雙鏈環狀DNA。乙型肝炎是全球廣泛分布的傳染病，但不同地區HBV感染的流行強度差異很大。據世界衛生組織報道，全球約20億人曾感染過HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染者，每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝癌。2006年全國乙型肝炎流行病學調查結果表明，我國1～59歲一般人群乙肝病毒表面抗原(HBV?surface?antigen，HBsAg)攜帶率為7.18％，5歲以下兒童的HbsAg攜帶率僅為0.96％。據此推算，我國現有的慢性HBV感染者約有9300萬人，其中慢性乙型肝炎患者約2000萬例。我國每年因肝病死亡的約有30萬人左右。

近年來，慢性乙型肝炎的治療取得了很大改善，目前獲得批準的用于治療慢性乙型肝炎的藥物有兩大類，一類是干擾素，一類是核苷類似物。目前已經上市的核苷類似物藥物有5種，分別是拉米夫定(Lamivudine，LAM，1998年上市)、阿德福韋酯(Adefovir，ADV，2002年上市)、恩替卡韋(Entecavir，ETV，2005年上市)、替比夫定(Telbivudine，LDT，2007年上市)、替諾福韋(Tenofovir，TDF)、恩曲他濱(Emtricitabine，FTC)。這類藥物是通過干擾病毒的逆轉錄過程和抑制DNA合成來抑制病毒DNA的復制，使患者的病毒DNA水平快速下降。這類藥物的優勢在于口服藥物且安全可靠。

但是核苷類似物藥物只能抑制病毒復制，而不能根除病毒，因此需要長期使用。而隨著核苷類藥物在國內使用頻率及年限的增加，HBV耐藥突變率逐年增高，例如1998年批準使用的拉米夫定(LAM)，治療1～4年的基因耐藥率分別為14％、38％、49％、66％，且呈現繼續上升趨勢，其他類藥物也出現不同程度的耐藥性。

目前報道的核苷類似物藥物：拉米夫定、阿德福韋酯、恩替卡韋、替比夫定、替諾福韋、恩曲他濱在中國人群中常見的耐藥基因突變位點有18個。rtV173L、rtL179P、rtL180M、rtA181V/T、rtT184A/G/I/S、rtA194T/M、rtA200V、rtS202G/I、rtM204V/I/S、rtV207M/I/L、rtS213T、rtV214A、rtQ215S、rtN236T、rtP237H、rtN238T/D、rtK241E、rtM250V。其中，rtV173L、rtM204V/I/S、rtL180M與恩曲他濱的耐藥有關；rtV173L、rtL179P、rtL180M、rtA200V、rtM204V/I/S、rtV207M/I/L、rtS213T與拉米夫定的耐藥有關；rtV173L、rtL180M、rtT184A/G/I/S、rtS202G/I、rtM204V/I/S、rtM250V與恩替卡韋的耐藥有關；rtM204V/I/S與替比夫定耐藥有關，rtA194T/M與替諾福韋耐藥有關；rtA181V/T、rtK241E、rtQ215S、rtN236T、rtP237H、rtN238T/D、rtV214A與阿德福韋酯耐藥有關。耐藥位點基因突變導致病人對核苷類似物產生耐藥后，病人血清的谷丙轉氨酶水平和病毒DNA水平升高，甚至病情惡化。

因此，建立簡單、快速的乙型肝炎病毒耐藥基因突變檢測方法，能夠監測上述18個耐藥基因突變位點中的一個或數個的突變情況，及時發現病人的耐藥性情況，從而調整用藥和治療方案，這對于促進乙型肝炎病毒的臨床治療有非常重要的意義。

發明內容

本發明提供了一種檢測乙型肝炎病毒的多耐藥基因突變位點方法，檢測探針以及檢測試劑盒。

本發明所能夠檢測的乙型肝炎病毒的耐藥基因突變位點列表如下：

表1乙型肝炎病毒的耐藥基因突變位點列表

本發明提供了一種乙型肝炎病毒耐藥基因突變的檢測探針，所述的耐藥基因突變位點為rtV173L、rtL179P、rtL180M、rtA181V/T、rtT184A/G/I/S、rtA194T/M、rtA200V、rtS202G/I、rtM204V/I/S、rtV207M/I/L、rtS213T、rtV214A、rtQ215S、rtN236T、rtP237H、rtN238T/D、rtK241E、rtM250V中的任意一種或幾種，所述的檢測探針為5’-TAGGTCTATTTACAGGCAGTTTTCG-3’。