[發明專利]葡萄幼果兩刀取胚法

有效

• 申請號: 201110252491.5
• 申請日: 2011-08-30
• 公開（公告）號: CN102349447A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 伍新宇;羅淑萍;梅新娣;夏培蓓;潘明啟
• 申請（專利權）人: 新疆農業科學院園藝作物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

發明領域

本發明涉及園藝生物技術領域。具體的說，本發明涉及一種葡萄幼果取胚的技術領域。

背景技術

傳統葡萄胚挽救技術中，葡萄無菌胚的剝取有兩種方法。一是摘取果粒，用自來水沖洗干凈，用無菌的鑷子和手術刀剝出胚珠，放置于無菌操作臺內，將胚珠先用70％乙醇消毒、無菌水沖洗，再用0.1％升汞消毒、無菌水沖洗，得到無菌胚，但胚珠成活率和胚珠發育率低。二是摘取幼果，用自來水沖洗，再用70％乙醇浸潤后用無菌水沖洗一次，在超凈工作臺上倒入0.1％升汞浸泡并振蕩幾次，之后用無菌水漂洗，用無菌的鑷子和手術刀在培養皿中將果粒剖開，取出胚珠，但取胚效率不高，易污染。

發明內容

本發明的主要目的就是針對目前傳統葡萄胚挽救技術中采用葡萄無菌胚的剝取方法存在的胚珠成活率和胚珠發育率低，以及取胚效率不高，易污染的技術現狀。

本發明提供一種葡萄幼果取胚方法，具有無污染，胚珠成活率及發育率高等特點，提高了效率，節約了資源。

本發明通過以下技術方案實現的：通過在無菌操作臺內將葡萄幼果用75％乙醇消毒，雙手消毒，左手抓緊果梗及果實基部，右手持手術刀第一刀從中部靠胚一側約果粒2/5處橫割一圈，深度不傷及胚，用手輕輕掰開，看清胚著生部位，第二刀從中豎切一刀成兩半，最后用刀尖將胚珠沾出或挑出。

本發明提供了一種葡萄幼果兩刀取胚的方法，包括以下步驟：

(1)帶柄剪下葡萄幼果，去除傷殘、畸形果，在流動自來水下沖洗干凈；

(2)在無菌操作臺內，將果粒浸入裝有75％乙醇的燒杯中，用玻璃棒攪動10圈，用無菌水沖洗3次，稍濾干待用；

(3)雙手消毒并戴無菌手套，左手抓緊果梗及果實基部，右手持無菌手術刀第一刀用刀刃的后部從果粒中部靠胚一側果粒2/5處橫割一圈，深度不傷及胚，用雙手輕輕掰開；

(4)看清胚著生部位，第二刀用手術刀中部從中豎切一刀成兩半；

(5)將1/5果粒果皮朝下放在托盤上，另1/5果粒用手捏住，用刀尖輕剝果肉，將胚珠沾出或挑出，直接用刀尖將胚珠接種至胚珠發育培養基。

本發明中，所用器皿、器械及雙手均需消毒，每一瓶培養基接種完畢應將刀片消毒。

通過實施本發明具體的發明內容，可以達到以下效果：

因在無菌臺內操作，稍感不便，本發明提供的方法適于葡萄果粒轉色變軟前的取胚，消毒直接作用于果皮而非幼胚，整個取胚過程僅刀尖接觸幼胚，具有無污染，胚珠成活率及發育率高的特點，總體上提高了效率，節約了資源。

具體實施方式

下面，舉實施例說明本發明，但是，本發明并不限于下述的實施例。另外，在下述的說明中，如無特別說明，％皆指m/m質量百分比。

本發明中選用的所有試劑、工具和儀器都為本領域熟知選用的，但不限制本發明的實施，其他本領域熟知的一些試劑和設備都可適用于本發明以下實施方式的實施。

實施例：

通過在無菌操作臺內將葡萄幼果用75％乙醇消毒，雙手消毒，左手抓緊果梗及果實基部，右手持手術刀第一刀從中部靠胚一側約果粒2/5處橫割一圈，深度不傷及胚，用手輕輕掰開，看清胚著生部位，第二刀從中豎切一刀成兩半，最后用刀尖將胚珠沾出或挑出。

本發明因采用在無菌臺內操作，稍感不便，該方法適于葡萄果粒轉色變軟前的取胚，具有無污染，胚珠成活率及發育率高的特點，總體上提高了效率，節約了資源。葡萄幼果兩刀取胚法也可用于無需消毒和無菌操作的果實取胚，效率更高。

實施例：

(1)將帶柄剪下葡萄幼果，去除傷殘、畸形果，在流動自來水下沖洗干凈；

(2)將果粒浸入裝有75％乙醇的燒杯中，置于無菌操作臺內，用玻璃棒攪動10圈，用無菌水沖洗2-3次，稍濾干待用；

(3)雙手消毒并戴無菌手套，左手抓緊果梗及果實基部，右手持無菌手術刀第一刀用刀刃的后部從果粒中部靠胚一側果粒2/5處橫割一圈，深度不傷及胚，用雙手輕輕掰開；

(4)看清胚著生部位，第二刀用手術刀中部從中豎切一刀成兩半；

(5)將1/5果粒果皮朝下放在托盤上，另1/5果粒用手捏住，用刀尖輕剝果肉，將胚珠沾出或挑出，直接用刀尖將胚珠接種至胚珠發育培養基。