[發明專利]豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒檢測用引物、探針及檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201110240542.2
• 申請日: 2011-08-22
• 公開（公告）號: CN102277454A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 袁秀芳;王一成;徐麗華;李軍星;劉鄧
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

1.一組檢測豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的核苷酸引物和探針，其特征在于，所述核苷酸引物和探針為序列表SEQ?ID?NO：1至SEQ?ID?NO：6，其中序列SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2分別為檢測豬傳染性胃腸炎病毒的正義引物和反義引物，序列SEQ?ID?NO：3為檢測豬傳染性胃腸炎病毒的熒光探針，序列SEQ?ID?NO：4和SEQ?ID?NO：5分別為檢測豬流行性腹瀉病毒的正義引物和反義引物，序列SEQ?ID?NO：6為檢測豬流行性腹瀉病毒的熒光探針。

2.根據權利要求1所述的檢測豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的核苷酸引物和探針，其特征在于：所述探針SEQ?ID?NO：3的5’端標記報告熒光基團JOE，3’端標記淬滅熒光基團TAMRA。

3.根據權利要求1所述的檢測豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的核苷酸引物和探針，其特征在于：所述探針SEQ?ID?NO：6的5’端標記報告熒光基團FAM，3’端標記淬滅熒光基團TAMRA。

4.一種豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的檢測試劑盒，其特征在于，由以下組分組成：

1）RNA提取試劑；

2）RNA標準品：為豬傳染性胃腸炎病毒體外轉錄的RNA片段，其對應的DNA序列為序列表SEQ?ID?No：9；和豬流行性腹瀉病毒體外轉錄的RNA片段，其對應的DNA序列為序列表SEQ?ID?No：12；

3）實時定量RT-PCR反應液，其包括：含有dNTP的RT-PCR緩沖液，檢測豬傳染性胃腸炎病毒的正義引物、反義引物和熒光探針，檢測豬流行性腹瀉病毒的正義引物、反義引物和熒光探針，Taq?DNA聚合酶，反轉錄酶，熒光定量PCR參比染料；

4）陰性對照：DEPC水；

5）DEPT水；

其中，檢測豬傳染性胃腸炎病毒的正義引物為序列表SEQ?ID?No：1所示的核苷酸序列，反義引物為序列表SEQ?ID?No：2所示的核苷酸序列，熒光探針為序列表SEQ?ID?No：3所示的核苷酸序列，其5’端標記報告熒光基團JOE，3’端標記淬滅熒光基團TAMRA；檢測豬流行性腹瀉病毒的正義引物為序列表SEQ?ID?No：4所示的核苷酸序列，反義引物為序列表SEQ?ID?No：5所示的核苷酸序列，熒光探針為序列表SEQ?ID?No：6所示的核苷酸序列，其5’端標記報告熒光基團FAM，3’端標記淬滅熒光基團TAMRA。

5.根據權利要求4所述的豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的檢測試劑盒，其特征在于，所述RNA提取試劑為RNA提取試劑盒。

6.根據權利要求4所述的豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的檢測試劑盒，其特征在于，所述實時定量RT-PCR反應液包括：1×含有dNTP的RT-PCR緩沖液，檢測豬傳染性胃腸炎病毒的正義引物0.2μM、反義引物0.2μM和熒光探針0.4μM，檢測豬流行性腹瀉病毒的正義引物0.2μM、反義引物0.2μM和熒光探針0.4μM，Taq?DNA聚合酶2U，反轉錄酶5U，1×熒光定量PCR參比染料。

7.根據權利要求6所述的豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的檢測試劑盒，其特征在于，所述含有dNTP的RT-PCR緩沖液為One?Step?RT-PCR?Buffer，所述熒光定量PCR參比染料為ROX?Reference?Dye，所述Taq?DNA聚合酶為TaKaRa?Ex?Taq^TM?HS，所述反轉錄酶為PrimeScript^TMRT?Enzyme?MixⅡ。