[發(fā)明專利]一種香石竹的超低溫保存方法以及再培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110235122.5
• 申請日: 2011-08-16
• 公開（公告）號: CN102379281A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林田;劉灶長;楊華;李天菲;陳海榮;羅利軍
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)生物基因中心
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00;A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.一種香石竹的超低溫保存方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)切取香石竹組培苗的莖尖進行預培養(yǎng)；

(2)預培養(yǎng)后的莖尖用含有1～3mol·L^-1甘油和0.2～0.6mol·L^-1蔗糖的MS液體培養(yǎng)基預處理20～40min；

(3)預處理后的莖尖轉(zhuǎn)入玻璃化保護劑中處理60～80min；

(4)步驟(3)處理后的莖尖投入液氮中保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述步驟(2)為預培養(yǎng)后的莖尖用含有2mol·L^-1甘油和0.4mol·L^-1蔗糖的MS液體培養(yǎng)基預處理30min；所述步驟(3)為預處理后的莖尖轉(zhuǎn)入玻璃化保護劑中處理80min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的保存方法，其特征在于，所述步驟(1)為將香石竹組培苗逐層剝?nèi)ネ鈱尤~片，至剩余1～2片護葉包圍莖尖，切取1～3mm莖尖進行預培養(yǎng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的保存方法，其特征在于，步驟(1)所述的預培養(yǎng)方法是將所述莖尖在含有0.3～0.5mol·L^-1蔗糖的MS固體培養(yǎng)基中，0～10℃暗培養(yǎng)1～5天。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的保存方法，其特征在于，步驟(3)所述的玻璃化保護劑為1～5mol·L^-1甘油、1～5mol·L^-1乙二醇、1～5mol·L^-1二甲基亞砜和0.1～0.5mol·L^-1蔗糖組成的混合溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的保存方法，其特征在于，所述步驟(4)為：將所述莖尖轉(zhuǎn)移到裝有預冷至0～5℃的玻璃化保護劑冷凍管中，每管裝有5～15個莖尖，再將所述冷凍管投入液氮中保存。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的保存方法，其特征在于，所述步驟(4)為：先將所述莖尖與3～8μl玻璃化保護劑在無菌鋁箔條上形成小液滴，然后將所述鋁箔條投入充滿液氮的安瓿管中，最后再將所述安瓿管投入液氮中保存。

8.權(quán)利要求1-7任一項所述超低溫保存方法保存后的香石竹的再培養(yǎng)方法，其特征在于，先將超低溫保存的香石竹莖尖進行解凍和洗滌，再經(jīng)過培養(yǎng)即可得到香石竹植株。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的再培養(yǎng)方法，其特征在于，所述解凍和洗滌的過程為將所述莖尖放入35～50℃的水浴解凍1～3分鐘，然后在室溫下用含有1～2mol·L^-1蔗糖的MS培養(yǎng)液洗滌1～3次，每次5～10min；或?qū)⑺銮o尖直接放入含有1～2mol·L^-1蔗糖的MS培養(yǎng)液解凍和洗滌5～10min。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的再培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)的方法是在含有0.3～0.6mg·L^-1?BA、0.05～0.15mg·L^-1?NAA和0.3～0.6mg·L^-1?GA3的MS半固體培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)或弱光培養(yǎng)2～5天，至莖尖返綠并有萌動跡象時再轉(zhuǎn)入MS固體培養(yǎng)基中常光培養(yǎng)。