[發明專利]用于脂肪干細胞的無血清凍存液及脂肪干細胞庫的建立

有效

• 申請號: 201110227449.8
• 申請日: 2011-08-09
• 公開（公告）號: CN102550542A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 張麗;張炳強;張露億;曹衛
• 申請（專利權）人: 臻景生物技術（上海）有限公司;臻景生物技術（無錫）有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C40B40/02;C40B50/06
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

1.一種無血清凍存液，其特征在于，包括以下組分：無血清培養基、二甲基亞砜(DMSO)和血清替代組分Knockout^TM?Serum?Replacement(KSR)，且所述凍存液不含血清。

2.如權利要求1所述的無血清凍存液，其特征在于，按體積計，無血清培養基的含量為a，a選自5％-15％(v/v)，DMSO含量為b，b選自8％-20％(v/v)，KSR含量為c，c選自70％-85％(v/v)，且a+b+c≤100％。

3.權利要求1所述無血清凍存液的用途，其特征在于，它被用于長期保存脂肪干細胞和/或建立脂肪干細胞庫。

4.一種脂肪干細胞混合物，其特征在于，所述混合物包括以下組分：

脂肪干細胞，和

權利要求1所述的無血清凍存液。

5.一種脂肪干細胞庫，其特征在于，所述細胞庫含有權利要求4所述的脂肪干細胞混合物。

6.如權利要求5所述的細胞庫，其特征在于，所述脂肪干細胞和無血清凍存液的混合物用程序梯度降溫后，液氮保存。

7.如權利要求5所述的細胞庫，其特征在于，所述細胞庫中的復蘇后的脂肪干細胞具有誘導成脂的能力。

8.如權利要求5所述的細胞庫，其特征在于，所述細胞庫中的復蘇后的脂肪干細胞的存活率≥90％。

9.權利要求5所述脂肪干細胞庫的用途，其特征在于，它被用于長期保存脂肪干細胞。

10.一種脂肪干細胞庫的建立方法，其特征在于，包括步驟：

(i)對獲得的含脂肪干細胞的脂肪組織材料進行洗滌，從而獲得去除了血細胞的組織混合物；

(ii)對步驟(i)得到的組織混合物進行消化，得到經消化的組織混合物；

(iii)對上一步驟獲得的經消化的組織混合物進行過濾，去除未消化的組織塊，獲得含脂肪干細胞的濾液；

(iv)對上一步驟獲得的濾液進行離心，棄去上層的脂肪，得到的沉淀為脂肪干細胞；

(v)對步驟(iv)得到的脂肪干細胞進行接種傳代，得到脂肪間充質干細胞；

(vi)消化上一步驟的脂肪間充質干細胞，得到分散的脂肪干細胞；

(vii)用權利要求1所述的無血清凍存液低溫保存步驟(vi)得到的脂肪干細胞，得到脂肪干細胞庫。