[發明專利]復合載體的多環芳烴降解菌劑及其制備方法

無效

• 申請號: 201110224944.3
• 申請日: 2011-08-08
• 公開（公告）號: CN102392012A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 徐建明;何艷;王嬌嬌;徐民民;馬斌
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;B09C1/10;A62D3/02;A62D101/20
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.復合載體的多環芳烴降解菌劑，其特征是：由Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌懸液和載體組成，所述Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌懸液與載體的體積/質量比為：每20～50ml的Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌懸液中加入15g的載體；

所述每ml的Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌懸液中含有5.0～6.0*10⁸CFU的Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌體；所述載體由黑炭和腐殖質組成，所述黑炭和腐殖質的質量比為1.8～2.2∶1。

2.根據權利要求1所述的復合載體的多環芳烴降解菌劑，其特征是：所述腐殖質為森林土壤剖面的O層。

3.如權利要求1或2所述的復合載體的多環芳烴降解菌劑的制備方法，其特征是包括如下步驟：

1)、菌懸液的制備：

利用Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1的單菌落制備Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌懸液，所述每ml的Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌懸液中含有5.0～6.0*10⁸CFU的Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌體；

2)、載體原料的準備：

黑炭用0.005～0.015mol/L的HCL調節至中性，干燥；

腐殖質用0.005～0.01mol/L的NaOH調節至中性，干燥；

3)、將步驟2)所得的黑炭和步驟2)所得的腐殖質按照1.8～2.2∶1的質量比混合后，得載體；

先將所述載體滅菌，然后加入步驟1)所得的Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌懸液，每15g的載體中加入20～50ml的Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌懸液，再加入30～50ml的無菌水；均勻混合后冷凍干燥，得復合載體的多環芳烴降解菌劑。

4.根據權利要求3所述的復合載體的多環芳烴降解菌劑的制備方法，其特征是：所述步驟1)為：

挑取Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1的單菌落接種于裝有LB培養基的三角瓶中，于30℃，120rpm避光水浴振蕩培養22～26小時；然后調節至每ml的Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌懸液中含有5.0～6.0*10⁸CFU的Mycobacterium?vanbaalenii.PYR-1菌體。

5.根據權利要求4所述的復合載體的多環芳烴降解菌劑的制備方法，其特征是：所述步驟3)中的冷凍干燥為：于-56～-50℃干燥6～8h。

6.根據權利要求5所述的復合載體的多環芳烴降解菌劑的制備方法，其特征是：所述LB培養液的制備方法如下：在每升水中加入酵母提取物5g、蛋白胨10g和Nacl?5g，然后用NaOH調PH?7.4～7.6。

7.根據權利要求6所述的復合載體的多環芳烴降解菌劑的制備方法，其特征是：將步驟2)所得的黑炭和步驟2)所得的腐殖質按照2∶1的質量比混合后，得載體。