[發(fā)明專利]豬血來源的降血壓多肽及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110223555.9
• 申請日: 2011-08-05
• 公開（公告）號: CN102276694A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 國錦琳;任艷;萬德光
• 申請（專利權(quán)）人: 成都中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12N15/12;C12N15/63;A61K38/08;A61P9/12
• 代理公司: 成都虹橋?qū)＠聞?wù)所 51124
• 代理人: 武森濤;梁鑫

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種豬血來源的降血壓多肽及其用途。

背景技術(shù)

豬血，有著悠久的藥用歷史，自漢代起，歷代本草均把豬血單獨(dú)列出，記載了它的藥用功效：“補(bǔ)血養(yǎng)心，熄風(fēng)鎮(zhèn)驚，下氣，止血”等等；同時(shí)還收錄了大量的驗(yàn)方。民間也廣泛食用豬血預(yù)防、治療疾病。現(xiàn)代研究亦表明，豬血不僅含有人體所必需的8種氨基酸在內(nèi)的18種氨基酸，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，還能夠治療貧血、白血病，降低血脂，促進(jìn)傷口愈合等。然而現(xiàn)在，人們主要利用了該品種的食用性，很大程度上忽略了它的藥用功效。這主要是因?yàn)樨i血藥用功能物質(zhì)基礎(chǔ)不明，對它的藥用基礎(chǔ)性研究還十分薄弱。

國外特別是日本以豬血為原料，研究酶解后的的生物活性肽，多肽的部分功能與本草記載相符。我國豬血資源豐富，年產(chǎn)量約為10億公斤，但僅有一小部分應(yīng)用于食品、飼料產(chǎn)業(yè)，絕大部分成為廢棄物。與我國歷史背景類似的日本對豬血的開發(fā)利用率為50～60％左右(主要根據(jù)本草記載利用現(xiàn)代生物技術(shù)進(jìn)行深度加工后開發(fā)為藥品)，究其原因主要是國內(nèi)對該資源重視度不夠，有效成分不明確，難以深度利用。國內(nèi)該資源的豐富性與低水平的利用現(xiàn)狀以及本草記載使用的歷史與現(xiàn)今國外研究利用的熱度，促使我們應(yīng)該對這一資源引起重視。

國外由蛋白質(zhì)酶解獲得的活性肽，是功能性食品、藥品開發(fā)研究最活躍的領(lǐng)域之一。研究者從食品蛋白質(zhì)的酶解物中發(fā)現(xiàn)了一些小分子肽，這些肽按生理功能主要可分為：嗎啡樣活性肽、抗高血壓肽、免疫調(diào)節(jié)肽、促進(jìn)鈣吸收的酪蛋白磷酸肽、抗血栓肽、促進(jìn)DNA合成和細(xì)胞生長的肽、抗菌肽、抗癌肽、促進(jìn)雙歧桿菌生長的肽等。

以豬血為蛋白源的生物活性肽是通過現(xiàn)代生物技術(shù)酶解后將豬血中的血紅蛋白轉(zhuǎn)化為小分子肽。研究表明，小分子豬血肽不僅有很好的溶解性、低粘度，最新研究表明，飲食中的寡肽(2～3個(gè)氨基酸)和多肽(10～51個(gè)氨基酸)能夠完整地通過腸道吸收，作為生物活性肽在組織水平上引起機(jī)體的生物學(xué)效應(yīng)。而且，蛋白質(zhì)利用率高，它還具有低抗原性，不會產(chǎn)生過敏反應(yīng)。

1977年Dardenne和Pleau等從豬血清中分離和精制了免疫調(diào)節(jié)激素-胸腺肽(TF)，并進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析，獲得了其氨基酸序列，分子量857Da。我國馮啟浩等通過藥理研究表明，從豬血中得到的TF具有顯著的免疫活性。越來越多的研究關(guān)注以豬血蛋白為來源的功能性多肽。Kazue?Mito等人酶解豬血珠蛋白得到了4種具有抑制ACE活性的多肽，并報(bào)道了去哦氨基酸序列。張艷梅等對豬血中抗菌肽類物質(zhì)進(jìn)行分離純化和抗菌活性研究；王延卓從豬血中分離得到分子量為6kDa的多肽，其對大腸桿菌質(zhì)控株ATCC25922抗菌活性最好。方俊等對豬血蛋白多肽抗氧化功能進(jìn)行研究。目前需要在豬血中發(fā)現(xiàn)新的活性多肽，以為本領(lǐng)域提供新的選擇。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供新的降血壓功能多肽。

本發(fā)明解決技術(shù)問題的技術(shù)方案是提供一種新的豬血來源的降血壓多肽。該降血壓多肽：

(1)是具有SEQ?ID?No.6所述的氨基酸序列的多肽；

或者為：

(2)是在所述SEQ?ID?No.6所示的氨基酸序列基礎(chǔ)上經(jīng)過取代、缺失、或者添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸后且具有相同或相似功能的多肽。

上述多肽的功能為降血壓。

本發(fā)明還提供了上述降血壓多肽的編碼核苷酸序列。

本發(fā)明還提供了含有上述的編碼核苷酸序列的載體。

本發(fā)明還提供了含有上述載體的宿主細(xì)胞。

本發(fā)明另外也提供了上述降血壓多肽在制備降血壓藥物中的用途。

當(dāng)然，本發(fā)明也提供了一種新的降血壓藥物。該降血壓藥物含有上述的降血壓多肽作為有效成分。

進(jìn)一步的，上述的降血壓藥物的劑型為口服制劑。

更進(jìn)一步的，上述的口服制劑主要為膠囊劑、片劑、滴丸、含片、分散片、片劑或顆粒劑等。

本發(fā)明以豬血為起始的研究材料。首先制得豬血脫色液，然后對豬血脫色液進(jìn)行進(jìn)一步的酶解。對酶種類進(jìn)行比較后，最后仍選用胃蛋白酶進(jìn)行酶解為佳，通過胃蛋白酶酶解，然后超濾，得到分子量＜3kDa的酶解液MC。

隨后再將酶解液MC通過凝膠層析分離、反向高效液相色譜法分離、體外ACE抑制活性跟蹤得到6個(gè)新多肽，Genebank多肽數(shù)據(jù)庫查詢表明這6種肽均為首次從豬血中分離得到。并通過基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)測定序列，其中一種的氨基酸序列為WVPSVY，其對ACE活性抑制的IC₅₀為0.425mg/ml。