[發(fā)明專利]柱切換-液相色譜分析生物體液中手性藥物對映體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110218577.6
• 申請日: 2011-07-29
• 公開（公告）號: CN102323368A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設計）人: 賈正平;王榮;謝華;武曉玉;張娟紅
• 申請（專利權）人: 賈正平
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/20
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.柱切換-液相色譜分析生物體液中手性藥物對映體的方法，包括以下步驟：

(1)將手性藥物消旋體標準品在5～30℃的溫度下用無水乙醇溶解，制成濃度為4mg/mL～5mg/mL的標準溶液；該標準溶液在5～30℃的溫度下用空白血漿稀釋，制成濃度為0.5mg/mL～1.5mg/mL的血漿樣品；

(2)將所述血漿樣品置1mL～5mL具塞離心試管中，以1000～8000r/min的轉速離心3～10min，精密吸取上清液置于一離心試管中作進樣備用；

(3)制備限進填料柱：將粒徑為5μm的硅膠外表面鍵合親水性的聚乙烯醇，其內(nèi)表面鍵合非極性的己胺，形成內(nèi)徑為4.6mm、長度為45mm的內(nèi)表面反相限進填料柱；

(4)制備手性固定相：將粒徑為5μm的硅膠表面涂覆有3，5-二甲基氨基苯甲酸酯的內(nèi)徑為4.6mm、長度為250mm的手性AE.Lichrom?CE?4色譜柱構成手性固定相Ⅰ；將粒徑為5μm的硅膠表面涂覆有4-甲基氨基苯甲酸酯的內(nèi)徑為4.6mm、長度為250mm的手性AE.Lichrom?CE?7色譜柱構成手性固定相Ⅱ；

(5)將所述手性固定相Ⅰ和所述手性固定相Ⅱ分別與所述限進填料柱相連，并將所述限進填料柱作為預處理柱、所述手性固定相作為分析柱放入柱切換限進填料-手性固定相高效液相色譜系統(tǒng)中；所述預處理柱與所述分析柱之間通過聚醚醚酮樹脂管連接，該聚醚醚酮樹脂管上設有切換閥；所述分析柱外接紫外檢測器；

(6)將所述步驟(2)所得的血漿樣品上清液注入到所述柱切換限進填料-手性固定相高效液相色譜系統(tǒng)中的進樣器，以硼酸鹽緩沖液-甲醇或水-甲醇為預處理柱流動相，以硼酸鹽緩沖液-異丙醇-無水乙醇為分析柱流動相，在紫外檢測波長為230～350nm、預處理流動相流速為0.5mL/min～2.0mL/min、分析流動相流速為0.5mL/min～2.0mL/min、溫度為15～40℃的條件下進行分離，得到不同出峰時間不同單一對映體的色譜圖。

2.如權利要求1所述的柱切換-液相色譜分析生物體液中手性藥物對映體的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的手性藥物消旋體標準品是指鹽酸普萘洛爾消旋體標準品。

3.如權利要求1所述的柱切換-液相色譜分析生物體液中手性藥物對映體的方法，其特征在于：所述步驟(5)中的切換閥的切換時間為1min～5min。

4.如權利要求1所述的柱切換-液相色譜分析生物體液中手性藥物對映體的方法，其特征在于：所述步驟(6)中預處理柱流動相中的硼酸鹽緩沖液與甲醇或水與甲醇的體積比為30～98∶2～70。

5.如權利要求1所述的柱切換-液相色譜分析生物體液中手性藥物對映體的方法，其特征在于：所述步驟(6)中分析柱流動相中的硼酸鹽緩沖液與異丙醇、乙醇的體積比為10～70∶10～40∶20～50。

6.如權利要求4或5所述的柱切換-液相色譜分析生物體液中手性藥物對映體的方法，其特征在于：所述硼酸鹽緩沖液是指將0.05mol/L的硼砂溶液與0.2mol/L的硼酸溶液按照1～8∶2～9的體積比配制的pH值為7.0～9.5的溶液。