[發明專利]一種直接從淀粉釀制啤酒的方法及其專用酵母

有效

• 申請號: 201110215758.3
• 申請日: 2011-07-29
• 公開（公告）號: CN102286389A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 王正祥;左志銳;石貴陽;樊游;楊華
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/56;C12N15/63;C12C5/00;C12C11/02;C12R1/865
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種專用啤酒酵母，命名為釀酒酵母（saccharomyces?cerevisiae）HH20110601，已保藏于中國武漢武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏編號CCTCC?NO：M?2011219。

2.根據權利要求1所述的專用啤酒酵母，其特征在于所具有的米根霉真菌α-淀粉酶酶活位于啤酒酵母S26細胞的表面，是通過基因工程技術實現的。

3.權利要求1所述的專用啤酒酵母的制備方法，其步驟為：?

（1）以米根霉為原料，提取其總RNA，以此為模板，在逆轉錄酶的作用下，合成一鏈cDNA，根據已公布的米根霉真菌α-淀粉酶基因序列設計一對引物，以一鏈cDNA為模板PCR擴增含自身信號肽的完整α-淀粉酶基因rRoamy，其基因編碼為：SEQ?ID?NO:?1；?

所述PCR擴增所用的引物為：

AA-F：5’-GCGGGATCCATGAAGTCTTTCTTAAGTCT-3’?，

AA-R：5’-CACGTCGACTTAGTTCTTTTGGAATATGG-3’?；?

其中在上游引物AA-F的5’端具有BamHI限制酶識別位點，下游引物AA-R的5’端具有SalI限制酶識別位點；

（2）以釀酒酵母S26染色體為模板，根據已公布的α凝集素序列設計一對引物，通過PCR擴增獲得α凝集素基因AG，其基因編碼為：SEQ?ID?NO:?4；

所述PCR擴增所用的引物為：

AG-F：5’-CCGGTCGACAGCGCCAAAAGCTCTTTTATC-3’，

AG-R：5’-CCGGTCGACTTTGATTATGTTCTTTCTAT-3’?；?

其中在上下游引物的5’端均具有SalI限制酶識別位點；

（3）將質粒pMGK和片段rRoamy分別用限制酶BamHI和SalI進行雙酶切，36~38℃反應過夜，然后分別將酶切產物純化；再將兩者混合，用T₄DNA連接酶在3~5℃反應14~16?h，得連接產物；將連接產物轉化大腸桿菌JM109感受態細胞，獲得重組質粒pMGK-?rRoamy，將該重組質粒和片段AG分別用限制性內切酶SalI進行酶切，將酶切產物純化，混合，連接；轉化大腸桿菌JM109獲得重組質粒pAA-AG；

（4）將重組質粒pAA-AG用SacII線性化后用醋酸鋰完整細胞轉化法轉化入啤酒酵母S26，轉化后的菌液涂布于G418抗性濃度為30?μg/mL的YPD平板，30℃培養3~5?d，篩選獲得含有重組質粒pAA-AG的專用啤酒酵母，即CCTCC?NO：M?2011219。

4.用權利要求1所述的專用啤酒酵母釀制啤酒的方法，其特征在于啤酒釀制主要原料為淀粉，少用或不用麥芽；原料溶液中淀粉質量濃度為10%~12%，液化后添加酒花使其體系質量分數為0.03%~0.07%，大麥麥芽質量分數為0~2%，然后接入6%-10%專用啤酒酵母CCTCC?NO：M?2011219，通過該專用啤酒酵母直接轉化為麥芽糖，最終發酵形成啤酒。