[發明專利]檢測乳或乳制品中氯霉素的預處理方法及乳或乳制品中氯霉素檢測方法

無效

• 申請號: 201110213989.0
• 申請日: 2011-07-29
• 公開（公告）號: CN102901778A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 崔濤;張雪峰;常建軍;李梅;劉衛星
• 申請（專利權）人: 內蒙古蒙牛乳業（集團）股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14
• 代理公司: 北京漢德知識產權代理事務所(普通合伙) 11328
• 代理人: 莊一方

技術領域

本發明涉及一種檢測乳及乳制品中抗生素含量的方法，尤其涉及一種檢測乳或乳制品中氯霉素的預處理方法，還涉及一種乳及乳制品中氯霉素殘留量的檢測方法。

背景技術

氯霉素(Chloramphenicol，CAP)屬氯霉素類抗生素（Chloramphenicols，CAPs），是獸醫臨床常用的抗生素，其主要毒副作用是抑制造血機能，會引起不可逆轉的再生障礙性貧血。

目前為了檢測乳或乳制品中的氯霉素，通常的預處理方法是利用固相萃取方法，用以提取和凈化樣本中的氯霉素。但是采用通常的預處理方法，檢測回收率不高，不能有效的消除雜質干擾。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測乳或乳制品中氯霉素的預處理方法，采用此方法可以提高檢測回收率，有效消除雜質干擾。

本發明的另一個目的是提供一種乳或乳制品中氯霉素的檢測方法，采用此方法檢測靈敏度高，檢測時間短。

本發明提供了一種檢測乳或乳制品中氯霉素的預處理方法，其包括以下步驟：

在樣品中加入樣品提取劑得到樣品提取液，將樣品提取液依次經渦旋處理、超聲處理和離心處理后取得一上清液，吹干上清液后所得物質用濃度為10%的甲醇溶液溶解，得到第一溶解液；

依次用甲醇、超純水流過固相提取小柱，然后將第一溶解液經固相提取小柱凈化和富集，再用超純水流過固相提取小柱后抽干固相提取小柱；

向抽干后的固相提取小柱中分別加入同等比例的甲醇和乙酸乙酯用于洗脫，收集的洗脫液吹干后，用濃度為50%的甲醇溶解得到第二溶液，將第二溶液經渦旋處理后再用微孔濾膜過濾。

在檢測乳或乳制品中氯霉素的預處理方法的一種示意性實施方式中，樣品提取劑為乙酸乙酯。

在檢測乳或乳制品中氯霉素的預處理方法的一種示意性實施方式中，在第一個步驟中用氮氣吹干上清液。

本發明還提供了一種乳或乳制品中氯霉素的檢測方法，其包括以下步驟：

a）制備氯霉素標準溶液，利用超高效液相色譜-電噴霧串聯三重四極桿質譜儀檢測，從而生成氯霉素的標準曲線圖；

b）利用上述預處理方法制備預處理溶液；

c）利用超高效液相色譜-電噴霧串聯三重四極桿質譜儀在與步驟a）相同的條件下檢測預處理溶液，得到一檢測結果；

d）將步驟c）中獲得的檢測結果與步驟a）中得到的標準曲線進行對比，通過計算確定樣品中的氯霉素含量。

乳或乳制品中氯霉素的檢測方法的一種示意性實施方式中，步驟a）中的氯霉素標準溶液為5種不同濃度的氯霉素標準溶液，5種不同濃度的氯霉素標準溶液的濃度分別為5.0ng/mL、1.0ng/mL、0.5ng/mL、0.3ng/mL、0.1ng/mL。

檢測乳或乳制品中氯霉素的預處理方法中，離心處理后得到上清液被吹干后得到的物質用10%的甲醇溶液溶解，10%的甲醇溶液可以充分溶解氯霉素，減少其在處理過程中的損失，同時10%的甲醇溶液在凈化過程中不會影響固相提取小柱的吸附，因而可以提高檢測的回收率。而且在第一溶液經固相提取小柱凈化和富集后，用超純水淋洗固相提取小柱，可除去固相提取小柱中富集的極性物質，可消除有機溶劑的干擾，提高預處理方法的回收率和準確度。另外，利用同等比例的甲醇和乙酸乙酯洗脫，甲醇的極性為6.6，乙酸乙酯的極性為4.3，采用上述溶液可以更加針對目標物的極性，使洗脫更完全，洗脫更干凈，以提高最終檢測的回收率。

附圖說明

以下附圖僅對本發明做示意性說明和解釋，并不限定本發明的范圍。

圖1是氯霉素的總離子流譜圖,其橫坐標表示時間（min）,縱坐標表示離子流響應信號強度的大小。

圖2是氯霉素子離子中定量離子的色譜圖，其橫坐標表示時間（min）,?縱坐標表示離子流響應信號強度的大小。

圖3是氯霉素子離子中定性離子的色譜圖，其橫坐標表示時間（min）,?縱坐標表示離子流響應信號強度的大小。

圖4是氯霉素的標準曲線圖，其橫坐標表示氯霉素的濃度，單位為納克/毫升(ng/mL)，縱坐標表示離子響應信號強度。

具體實施方式

下面將結合具體實施方案對本發明的方法做更詳細的說明。本領域技術人員應當理解，下述實施例均用于對本發明所要求保護的范圍進行實例性的描述，以此概括本發明的各參數的相對范圍，因而不能將之理解為對本發明的一種具體限制。

在本文中，樣品包括乳樣品或乳制品樣品，以下實施例采用的是牛奶樣品，但本領域技術人員可以理解，也可以在采用其他樣品。

實施例1

1）標準溶液的配制：