[發明專利]一種山慈菇提取物的提取方法

有效

• 申請號: 201110210066.X
• 申請日: 2011-07-26
• 公開（公告）號: CN102895523A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 周英;黃波;郭東貴;王慧娟;錢利安
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A61K36/898
• 分類號: A61K36/898;A61P35/00
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 劉楠

技術領域

本發明涉及中藥提取技術領域，特別是涉及一種山慈菇提取物的提取方法。

背景技術

山慈菇為蘭科植物杜鵑蘭?Cremastra?appendiculata?(D.Don)?Makino、獨蒜蘭Pleione?bulbocodioides?(Franch.)?Rolfe?和云南獨蒜蘭P.?yunnanensis?Rolfe?的干燥假鱗莖，具清熱解毒、化痰散結等功效，常用于癰腫疔毒，瘰疬結核，淋巴結結核，蛇蟲叮咬等癥狀的治療，廣泛分布于長江流域以南地區及山西、陜西、甘肅等地。山慈菇作為中醫抗癌中藥已得到廣泛應用，特別是近年來在臨床上對乳腺癌、食道癌、胃癌、白血病等惡性腫瘤表現出的良好療效而備受關注。但就當前山慈菇的開發利用來看，臨床上主要以中藥復方的形式應用，其有效成分及藥理作用尚不十分明確，嚴重限制了山慈菇的深度開發及市場潛能的發揮。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服目前山慈菇在應用于藥物時有效成分及藥理作用不十分明確的缺陷，提供一種山慈菇提取物的提取方法，明確了各提取部位的藥理作用，可將提取物應用于制藥以提高藥效、減小服用劑量。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下的技術方案：

本發明山慈菇提取物的提取方法，包括如下步驟：

（1）粗提：取山慈菇，用乙醇提取，濾液濃縮得粗提物浸膏；

（2）萃取：將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋，稀釋液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分別濃縮得氯仿層浸膏和乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。

優選的，上述提取方法為：

（1）粗提：取山慈菇，粉碎，用5～15重量倍75～100%乙醇在室溫下浸提1～4次，然后再用5～15重量倍40～75%乙醇在室溫下浸提1～4次，殘渣用5～10重量倍50～95%乙醇于50～90℃水浴回流提取1～4次，合并所有提取液，過濾，濃縮，得粗提物浸膏；

（2）萃取：將粗提物浸膏用蒸餾水混懸均勻，用氯仿萃取1～7次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯萃取1～7次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。

最佳的，前述山慈菇提取物的提取方法為：

（1）粗提：取山慈菇，粉碎，用12重量倍95%乙醇在室溫下浸提2次，然后再用12重量倍75%乙醇在室溫下浸提2次，每次48小時，殘渣用8重量倍75%乙醇于70℃水浴回流提取2次，每次2h，合并所有提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，得粗提物浸膏；

（2）萃取：將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋至室溫下相對密度1.1～1.2，混懸均勻，用氯仿等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。

申請人對山慈菇提取物的化學成分進行了系統預試和體外抗腫瘤活性驗證，具體如下：

一、提取物化學成分系統預試

1、提取

山慈菇干燥假鱗莖30kg，粉碎，用體積分數為95%及75%的乙醇分別冷浸兩次，每次48h，最后再以75%乙醇，70℃水浴回流提取2次，每次2h，合并各次提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，得到粗提物總浸膏約2.0kg。

取粗提物總浸膏，加入適量蒸餾水均勻混懸，測試其相對密度在1.1～1.2之間為宜，再分別以氯仿、乙酸乙酯反復等體積萃取5次，合并各次萃取液，減壓濃縮，得到氯仿層部位浸膏約150g，乙酸乙酯層部位浸膏約100g；剩余部分再結合高濃度醇沉法(95%乙醇)得到醇層和水層部位浸膏。

2、山慈菇提取物化學成分系統預試

同一天然藥物中至少含有上百種化學成分，在著手研究山慈菇的化學成分時，有必要大致知曉其主要化學成分在不同極性段中的分布情況，這樣才便于在以后的研究中根據各類化學成分的性質選擇合理的研究方法?。

2.1供試樣品?

A：50%乙醇-山慈菇粗提物浸膏溶液，B：50%乙醇-山慈菇水層浸膏溶液，C：90%乙醇-山慈菇醇層浸膏溶液，D：甲醇-山慈菇乙酸乙酯層浸膏溶液，E：氯仿-甲醇(1:1)-山慈菇氯仿層浸膏溶液。

2.2系統預試方法

山慈菇提取物化學成分的系統預試，主要采用試管法對山慈菇粗提物以及萃取后得到水層、醇層、乙酸乙酯層及氯仿層部位進行定性鑒定，具體方法見表1。

表1?山慈菇化學成分定性檢測

2.3系統預試結果

山慈菇提取物系統預試結果見表2。