[發明專利]采用反轉錄環介導等溫擴增技術檢測煙草病毒的方法

無效

• 申請號: 201110205107.6
• 申請日: 2011-07-21
• 公開（公告）號: CN102286637A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 成巨龍;趙磊;胡翠華;郝興安;滿建云;吳云鋒
• 申請（專利權）人: 陜西省煙草研究所;西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 北京億騰知識產權代理事務所 11309
• 代理人: 陳惠蓮

1.一種采用反轉錄環介導等溫擴增技術檢測多種煙草病毒的方法，其中該方法包括煙草病毒總RNA提取，RT-LAMP反應和電泳檢測，確定病毒種類，其中煙草病毒選自黃瓜花葉病毒(CMV)、馬鈴薯Y病毒(PVY)、煙草蝕紋病毒(TEV)、煙草花葉病毒(TMV)和煙草脈帶花葉病毒(TVBMV)中的2種或2種以上，其中RT-LAMP反應采用的引物是包含如下5組引物中的2組或2組以上引物的引物組：

第1組引物，用于CMV病毒的RT-LAMP反應：

外引物(F3和B3)：

SEQ?ID?NO.1：5’-TCTACCGTGTGGGTGACA-3’；

SEQ?ID?NO.2：5’-GAGCACGGCGTACTTTCG-3’；

內引物(FIP和BIP)：

SEQ?ID?NO.3：5’-CCGTCCGCGAACATAGCAGAG-GTCCGTAAAGTTCCTGCCTC-3’；

SEQ?ID?NO.4：5’-GCTGCATCTGGAGTCCAAGCC-TGTCGCCAATATCAGCGC-3’；

第2組引物，用于PVY病毒的RT-LAMP反應：

外引物(F3和B3)：

SEQ?ID?NO.5：5’-CGCGCTATGCCTTTGACTT-3’；

SEQ?ID?NO.6：5’-TTGGAGAGACATCCTCGGT-3’；

內引物(FIP和BIP)：

SEQ?ID?NO.7：5’-CAATGCTGCGGCCTTCATTTGA-GGTCACATCACGAACACCAG-3’；

SEQ?ID?NO.8：5’-TCAGCCCAACCTCGACTTTTCG-GCCTCTCTGTGTTCTCCTCT-3’；

第3組引物，用于TEV病毒的RT-LAMP反應：

外引物(F3和B3)：

SEQ?ID?NO.9：5’-AAAACGCGCAGCCAACAT-3’；

SEQ?ID?NO.10：5’-CGTACTGCAGCAGCTTTCA-3’；

內引物(FIP和BIP)：

SEQ?ID?NO.11：5’-GGCATGTATGGTCGTTCCCTGT-GACACACTTCAGTGACCTGG-3’；

SEQ?ID?NO.12：5’-TTGTCACGCTATGCGTTCGACT-TTGCATATGCGCCTCCCT-3’；

第4組引物，用于TMV病毒的RT-LAMP反應：

外引物(F3和B3)：

SEQ?ID?NO.13：5’-GGAAACCTTCACCACAAGT-3’；

SEQ?ID?NO.14：5’-TATAGCGCTCCTTATGGC-3’；

內引物(FIP和BIP)：

SEQ?ID?NO.15：5’-GCTGTGACTAACGGATCTAATACCG-AGGTTCCCTGACAGTGAC-3’；

SEQ?ID?NO.16：5’-GAAGTTGAAAATCAGGCGAACCC-TGCGTCGTCTACTCTACG-3’；

第5組引物，用于TVBMV病毒的RT-LAMP反應：

外引物(F3和B3)：

SEQ?ID?NO.17：5’-AACGGAATGTGGGTCATG-3’；

SEQ?ID?NO.18：5’-TGTCATGTCAGTCAAATTGC-3’；

內引物(FIP和BIP)：

SEQ?ID?NO.19：5’-TGTTGGTTTGGCATGTTCCA-GATGGTGATGAACAGGTTG-3’；

SEQ?ID?NO.20：5’-TAGACAAATCATGGCACACTTTAGC-GGCATATACGGTTTCTCTGC-3’。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述引物組中包含5組引物SEQ?ID?NO.1-20。