[發明專利]用于口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測的引物和方法

無效

• 申請號: 201110203471.9
• 申請日: 2011-07-20
• 公開（公告）號: CN102260750A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 邱楊;黃偉;劉建麗;趙麗;陳進會;林濤
• 申請（專利權）人: 東莞出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 連平

1.一種用于口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測的引物，其特征在于，所述引物為：

上游引物UNFMDVpf1127：5’-TGGGTTTTACAAACCTGTGATGG-3’；

下游引物UNFMDVpr1221：5’-CCACGGAGATCAACTTCTCCTG-3’；

上游引物UNFMDVpr1221’：5’-CAGGAGAAGTTGATCTCCGTGG-3’；

下游引物UNFMDVpf1127’：5’-CCATCACAGGTTTGTAAAACCCA-3’；

上游引物Hfpf1117：其序列為上游引物UNFMDVpf1127向5’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

下游引物Hfpr1231：其序列為下游引物UNFMDVpr1221向3’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

下游引物Hfpr1211：其序列為下游引物UNFMDVpr1221向5’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

上游引物Hfpf1117’：其序列為上游引物UNFMDVpr1221’向5’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

下游引物Hfpf1231’：其序列為下游引物UNFMDVpf1127’向3’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

下游引物Hfpr1211’：其序列為下游引物UNFMDVpf1127’向5’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

采用上述引物做實時熒光RT-PCR檢測時，引物的配對方案為：上游引物UNFMDVpf1127和下游引物UNFMDVpr1221配對使用；上游引物UNFMDVpr1221’和下游引物UNFMDVpf1127’配對使用；上游引物Hfpf1117和下游引物Hfpr1231配對使用；上游引物Hfpf1117和下游引物Hfpr1211配對使用；上游引物Hfpf1117’和下游引物Hfpr1231’配對使用；上游引物Hfpf1117’和下游引物Hfpr1211’配對使用。

2.一種用于口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測的熒光探針，其特征在于，所述熒光探針序列為：

UNFMDVpv1181：5’-CTCTCCTTTGCACGCCGTGGG-3’；

UNFMDVpv1181’：5’-CCCACGGCGTGCAAAGGAGAG-3’；

UNFMDVpv1182：其序列為UNFMDVpv1181向5’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

UNFMDVpv1182’：其序列為UNFMDVpv1181向3’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

UNFMDVpv1183：其序列為UNFMDVpv1181’向5’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

UNFMDVpv1183’：其序列為UNFMDVpv1181’向3’端方向延伸10個堿基得到的堿基序列；

上述熒光探針分別用Joe、Rox、Ned、Hex、Tet、Fam或Vic熒光素標記探針序列的5’端，熒光淬滅基團標記探針序列的3’端。

3.一種口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測的方法，其特征在于，按照如下步驟進行：

(1)選擇權利要求1任一配對引物和權利要求2任一熒光探針；

(2)提取各種來源樣品中口蹄疫病毒的基因組RNA；

(3)確定最佳引物濃度、鎂離子濃度、反轉錄酶用量、Taq?DNA聚合酶用量和dNTPs濃度；

(4)選擇儀器的檢測通道；

(5)上機檢測，若得到口蹄疫病毒特異性的熒光曲線，則證明待檢樣品中含有口蹄疫病毒。

4.根據權利要求3所述一種口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測的方法，其特征在于，口蹄疫病毒的基因組RNA的提取方法為QIAamp?Viral?RNA?Mini?kit或Trizol核酸抽提試劑。