[發(fā)明專利]一種檢測(cè)黃牛FGF21基因單核苷酸多態(tài)性的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110201228.3
• 申請(qǐng)日: 2011-07-18
• 公開（公告）號(hào): CN102296110A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳宏;孫曉梅;李明勛;馬偉;藍(lán)賢勇;王璟;滑留帥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種快速檢測(cè)黃牛FGF21基因SNP的RFLP方法，其特征在于：以包含F(xiàn)GF21基因的待測(cè)黃牛基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增黃牛FGF21基因，發(fā)現(xiàn)4個(gè)SNP位點(diǎn)；針對(duì)這4個(gè)SNP位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)引物對(duì)F159、F297、F940、F1151，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用限制性內(nèi)切酶SalI、XhoI、XbaI、MspI分別酶切該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物，再用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切產(chǎn)物，根據(jù)電泳結(jié)果鑒定黃牛FGF21基因第159位、第297位、第940位、第1151位的單核苷酸多態(tài)性。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)黃牛FGF21基因SNP的RFLP方法，其特征在于，以包含F(xiàn)GF21基因的黃牛基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增黃牛FGF21基因。將PCR產(chǎn)物送測(cè)序，根據(jù)突變情況重新設(shè)計(jì)引物對(duì)F159、F297、F940、F1151，依次引入SalI、XhoI、XbaI、MspI酶切位點(diǎn)，PCR擴(kuò)增黃牛FGF21基因；

所述的引物對(duì)F159為：

上游F159-SalI：5′CCGCCAGCGGTACCTCTACACGGTCGA??3′，

下游R159：5′TCCAAGAGACCTGAGGGGAGAAAGTGGG??3′；

所述的引物對(duì)F297為：

上游F262-XhoI：5′CCTGAAGCAGTAGGGAATTGGGGCCTCG??3′，

下游R262：5′CACCGATCCGTACAGCTTCCCATCTGGC??3′；

所述的引物對(duì)F940為：

上游F940：5′CCTGGCTCATGCTGGGCGAAGGGTC??3′，

下游R940-XbaI：5′CGGAGGCAGGTCCCTCCTTAACCTCTAG??3′；

所述的引物對(duì)F1151為：

上游F1151：5′AGACCTAGACGATAAAGCTGAGAAAGGAGG??3′，

下游R1151-MspI：5′AAAGTGCAGCTGCGGGGATGAGAGCC??3′。

用限制性內(nèi)切酶SalI、XhoI、XbaI、MSpI分別酶切該四對(duì)引物的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，再用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，根據(jù)電泳結(jié)果鑒定黃牛FGF21基因第159位、第297位、第940位和第1151位的單核苷酸多態(tài)性。

3.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)黃牛FGF21基因SNP的RFLP方法，其特征在于：所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為3.5％。

4.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)黃牛FGF21基因SNP的RFLP方法，其特征在于，第159位的單核苷酸多態(tài)性為：TT基因型表現(xiàn)為244bp條帶，TC基因型表現(xiàn)為244bp、221bp和23bp條帶，CC基因型表現(xiàn)為221bp和23bp條帶；第297位的單核苷酸多態(tài)性為：CC基因型表現(xiàn)為205bp條帶，CG基因型表現(xiàn)為205bp、180bp和25bp條帶，GG基因型表現(xiàn)為180bp和25bp；第940位的單核苷酸多態(tài)性為：CC基因型表現(xiàn)為207bp條帶，CT基因型表現(xiàn)為207bp、179bp和28bp條帶，TT基因型表現(xiàn)為179bp和28bp；第1151位的單核苷酸多態(tài)性為：CC基因型表現(xiàn)為151bp和27bp條帶，CT基因型表現(xiàn)為178bp、151bp和27bp條帶，TT基因型表現(xiàn)為178bp。