[發明專利]一種利用鏈霉菌發酵生產安來霉素的優化工藝

無效

• 申請號: 201110200451.6
• 申請日: 2011-07-18
• 公開（公告）號: CN102250993A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 胡永紅;楊文革;萬文倩
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12P21/04
• 分類號: C12P21/04;C12R1/465
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;袁正英

技術領域

本發明涉及的是一種利用鏈霉菌發酵生產安來霉素的優化工藝，屬于農業生物技術、工業生物技術、發酵工程領域。

技術背景

飼用抗生素能促進畜禽生長、預防疾病發生，極大地提高了畜牧業經濟效益，許多國家的畜禽業都長期應用抗生素添加劑。然而，長期、廣泛、不加選擇地使用抗生素飼料給細菌性疾病的控制和治療帶來了極大的麻煩和困難。細菌耐藥性和藥物殘留等問題日益突出，也給人類的健康帶來潛在的威脅。目前這些情況已經引起世界各國政府及業內人士的高度重視。2006年，歐盟全面禁止了抗生素飼料添加劑的應用。我國是畜禽生產大國，但由于藥物殘留超標等問題，出口量僅占生產量的0.9％～1.2％。在全球經濟一體化的時代，要提高我國畜禽產品的國際競爭力，抗生素安全問題及對策研究已經迫在眉睫。只有對抗生素進行全面的認識及合理的應用，才能充分發揮其有利作用并避免對人類健康造成危害。當務之急便是針對微生物的耐藥性，研究并開發廣譜、高效、安全的新型飼料添加劑，這不僅能帶來顯著的經濟效益，還具有極其重要的社會意義。

安來霉素就是一種廣譜、高效、安全的新型抗生素飼料添加劑，對主要的革蘭氏陽性菌均具有強大殺菌作用；在需氧和厭氧條件下在腸道內不被降解，保持原有的抗菌活性；最重要的是安來霉素與臨床上其他抗生素之間無交叉耐藥性，且細菌的耐藥性產生非常緩慢，且耐藥性不穩定、易丟失；口服不被腸道吸收，不會產生藥物殘留問題。

安來霉素作為一種動物專用抗生素，既可以滿足人們對農產品安全性的要求，又可顯著降低農場品加工過程中的生產成。因此，專家預測，安來霉素還會在一段相當長的時間內充當促生長劑的主角。

縱觀國內外發展，國內目前尚無發酵法生產安來霉素的報導，雖然，日本武田公司實現了安來霉素的工業化生產，但報導的最高產量僅為4530mg/L。因此，研究和開發安來霉素的高效生產技術成為當前打破國外企業對安來霉素市場壟斷的關鍵。

發明內容

本發明的目的是為了改進現有技術的不足而提供一種利用鏈霉菌發酵生產安來霉素的優化工藝。

本發明提供一種利用鏈霉菌發酵生產安來霉素的優化工藝，主要通過培養基優化及補料工藝的優化，提高安來霉素發酵效價，提高發酵設備及原料的利用率；其步驟如下：(1)將鏈霉菌接種到到發酵培養基中，發酵培養基中各組分濃度為：葡萄糖20g/L～50g/L、淀粉5g/L～20g/L、玉米漿10g/L～30g/L、酵母膏1g/L～5g/L、黃豆餅粉5g/L～20g/L、氯化鈉5g/L～10g/L、碳酸鈣15～20g/L、氯化銨5～10g/L、磷酸二氫鉀2～5g/L、硫酸銨3g/L～5g/L、無機鹽離子0.4g/L～0.8g/L、氨基酸0.2mg/L-0.6mg/L；(2)采用補料培養的方法進行培養，發酵進行到70～78小時，向發酵體系流加葡萄糖溶液，使發酵液中碳源濃度保持在60g/L～100g/L，控制發酵液pH值，發酵周期為6-9天。

優選所述的無機鹽為MgSO₄，CuSO₄或FeSO₄；所述的氨基酸為半胱氨酸、精氨酸或絲氨酸。

優選所述流加的葡萄糖溶液的濃度為50g/L～150g/L。優選流加葡萄糖溶液時，用碳酸鈣或氫氧化鈉調節pH；使發酵液的pH保持在6.5～7.5；

上述鏈霉菌Streptomyces?sp.，參據的微生物(株)：NJWGY3665是由本實驗室從南京工業大學江浦校區的土壤中，初篩得到47株能抑制枯草芽孢桿菌生長的放線菌；經搖瓶復篩，用HPLC(高效液相色譜)檢測獲得一株安來霉素產生菌，通過生理生化特性實驗和16S?rDNA序列相似性分析，分類鑒定命名為鏈霉菌，并保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，其簡稱為CGMCC，登記入冊的編號是CGMCC?No.2410，保藏日期是：2008年3月21日。以此菌種作為生產菌株。

CGMCC?No.2410菌株具有下述性質：

1、形態特征：

菌株在高氏一號培養基上生長中度，氣生菌絲生長中度，孢子絲呈波曲狀，孢子成鏈狀排列，在電子顯微鏡下孢子成橢圓形。

2、培養特征：

28℃培養7-14天，觀察菌株在下列各種培養基上的特征。

表1CGMCC?No.2410菌株的培養特征

3、生理生化性質：