[發(fā)明專利]水稻種子谷蛋白GluA-1基因終止子及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110197897.8
• 申請(qǐng)日: 2011-07-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102250907A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曲樂(lè)慶;李文靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院植物研究所
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/21;C12N7/01;C12N15/82;A01H5/00;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種水稻種子谷蛋白GluA-1基因終止子及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

植物生物技術(shù)的最新發(fā)展不僅實(shí)現(xiàn)了傳統(tǒng)農(nóng)藝性狀的改良(如提高作物產(chǎn)量，增強(qiáng)抗病、抗蟲(chóng)、抗除草劑特性，改良品質(zhì)等)，而且使植物成為生物醫(yī)藥和工業(yè)產(chǎn)品的生物反應(yīng)器。絕大多數(shù)禾本科作物具有產(chǎn)量高、生產(chǎn)成本低、耐儲(chǔ)藏、生產(chǎn)規(guī)模容易控制、可直接食用等特點(diǎn)，并且其具備體內(nèi)翻譯后修飾的能力，因而成為第二代轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的理想載體。近年來(lái)利用水稻種子生產(chǎn)具有保健作用的外源蛋白和可食性疫苗研究發(fā)展很快，且已經(jīng)取得了巨大成功。如維生素A、具有降低血糖作用的大豆球蛋白(Glycinin)、具有預(yù)防和治療缺鐵性貧血和提高自身免疫功能的大豆鐵蛋白(Ferritin)、具有刺激胰島素分泌預(yù)防糖尿病發(fā)生功能的GLP、乙肝疫苗和花粉過(guò)敏癥疫苗等均成功地在水稻中表達(dá)并高水平累積。然而，進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)外源基因的高效表達(dá)必須在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平同時(shí)提高基因表達(dá)。啟動(dòng)子主要在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因表達(dá)，終止子則在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平同時(shí)起調(diào)控作用。

盡管目前廣泛應(yīng)用的終止子，如Nos、Ocs，與異源啟動(dòng)子組合后可啟動(dòng)報(bào)告基因在植物中的高表達(dá)，能夠滿足生物化學(xué)、生理學(xué)以及細(xì)胞定位方面的研究需求。然而，對(duì)于其他能夠提高基因表達(dá)的終止子研究較少。由于一些重要農(nóng)藝性狀以及植物次生代謝產(chǎn)物都是由多基因控制，提高單個(gè)基因的表達(dá)對(duì)于相關(guān)性狀改良作用不明顯。通過(guò)傳統(tǒng)轉(zhuǎn)化方法，如重復(fù)轉(zhuǎn)化或雜交來(lái)實(shí)現(xiàn)多基因轉(zhuǎn)化卻費(fèi)時(shí)費(fèi)力。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的多基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng)可以在一個(gè)表達(dá)載體中同時(shí)插入多個(gè)基因，為了避免轉(zhuǎn)基因同源性過(guò)高引起的轉(zhuǎn)基因沉默，這些基因需要由不同的啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)，不同的終止子終止轉(zhuǎn)錄。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一個(gè)終止子，名稱為tGluA-1，該終止子與nos終止子相比，可以提高外源基因的表達(dá)水平。

本發(fā)明所提供的終止子，為如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)由序列表中序列1所示的核苷酸序列組成的DNA分子；

2)與1)限定的DNA的序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性的分子；

3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交的分子。

所述嚴(yán)格條件可為如下：50℃，在7％十二烷基硫酸鈉(SDS)、0.5M?Na₃PO₄和lmM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，2×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?Na₃PO₄和lmM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，1×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?Na₃PO₄和lmM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?Na₃PO₄和lmM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?Na₃PO₄和lmM?EDTA的混合溶液中雜交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可為：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下雜交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

其中，序列表中序列1由498個(gè)核苷酸組成。

含有所述DNA分子的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系、重組菌或重組病毒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。