[發明專利]表達NY-ESO-1重組恥垢分枝桿菌的制備及應用

無效

• 申請號: 201110168492.1
• 申請日: 2011-06-21
• 公開（公告）號: CN102839186A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 陳丹丹;徐帆洪;高丹
• 申請（專利權）人: 上海生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/11;C12N15/56;C12N15/12;C12N15/74;C12N1/21;A61K48/00;A61K38/17;A61P35/00;C12R1/34
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 楊昀

1.一種用于重組腫瘤-睪丸抗原NY-ESO-1蛋白表達的質粒，所述質粒包含：

(a)β-半乳糖苷酶信號肽編碼序列或β-半乳糖苷酶編碼序列；和

(b)NY-ESO-1編碼序列。

2.如權利要求1所述的質粒，其特征在于，所述重組NY-ESO-1蛋白是β-半乳糖苷酶信號肽序列與NY-ESO-1的融合蛋白、或β-半乳糖苷酶全長序列與NY-ESO-1的融合蛋白。

3.如權利要求1所述的質粒，其特征在于，

所述β-半乳糖苷酶信號肽編碼序列選自如下所示的序列：GenBank號：L25634.1、SEQ?ID?NO：3所示序列編碼的多肽、或它們的保守性變異蛋白或其活性片段、或其中的氨基酸序列經過1-20個(優選1-10個，更優選1-5個)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且指導β-半乳糖苷酶定位于細胞壁或細胞膜上的信號序列；

所述β-半乳糖苷酶編碼序列選擇：GenBank號：L25634.1、SEQ?ID?NO：4所示序列、其同源序列或在嚴格條件下可與該序列雜交的序列；與所述編碼核酸的序列具有至少75％、80％、90％、95％、98％或更高相同性的多核苷酸；

所述NY-ESO-1編碼序列選自如下所示的序列：GenBank號U87459.1中所示序列、SEQ?ID?NO：1所示的序列、其同源序列或在嚴格條件下可與該序列雜交的序列；與所述編碼核酸的序列具有至少75％、80％、90％、95％、98％或更高相同性的多核苷酸序列。

4.如權利要求1所述的質粒，其特征在于，所述質粒包含SEQ?ID?NO：5或SEQID?NO：7所示的序列。

5.如權利要求1所述的質粒，其特征在于，所述質粒是穿梭質粒，其可在大腸桿菌、恥垢分枝桿菌或結核分枝桿菌中復制擴增。

6.如權利要求1所述的質粒，其特征在于，所述用于重組NY-ESO-1蛋白表達的質粒是基于選自下組的質粒構建的：pLA71、pLA73、pJH152或pJEM17。

7.一種重組恥垢分枝桿菌，其包含權利要求1-6中任一項所述的質粒。

8.如權利要求7所述的重組恥垢分枝桿菌，其特征在于，其表達重組的NY-ESO-1蛋白，并將該重組的蛋白定位于細胞壁。?

9.一種免疫組合物，所述組合物包含：

(i)權利要求1-6中任一項所述的質粒、權利要求7-8中任一項所述的重組恥垢分枝桿菌或其裂解物或細胞壁部分；和

(ii)免疫學上可接受的載體和/或佐劑。

10.權利要求1-6中任一項所述的質粒、權利要求7-8中任一項所述的重組恥垢分枝桿菌或其裂解物或細胞壁部分在制備用于預防和/或治療NY-ESO-1陽性腫瘤的藥物組合物或疫苗中的用途。

11.一種制備權利要求7或8所述的重組恥垢分枝桿菌的方法，所述方法包括如下步驟：

(1)提供權利要求1-6中任一項所述的質粒；

(2)用所述質粒轉化恥垢分枝桿菌以獲得權利要求7或8所述的重組恥垢分枝桿菌。?