[發明專利]一種腸道病毒71型（EV71）膠體金快速檢測試紙條

無效

• 申請號: 201110150289.1
• 申請日: 2011-06-07
• 公開（公告）號: CN102323413A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 劉明
• 申請（專利權）人: 北京莊笛浩禾生物醫學科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及一種腸道病毒71型(EV71)抗原檢測試紙條及其應用。?

背景技術

腸道病毒71型(EV71)屬于腸病毒屬A型，是克薩奇病毒A16(CA16)的近親，EV71的感染可以導致手足口病(hand，foot?and?mouth?disease，HFMD)、腦(encephalitis)、無菌性腦膜炎(asepicmeningitis)和脊髓灰質炎樣麻痹(poliomyelitis-like?paralysis)等多種與神經系統相關的疾病。目前，人類是EV71病毒唯一已知的自然宿主，病毒主要通過人群間的密切接觸傳播。根據核苷酸序列的差異，可將EV71分為A、B、C等3個基因型，B型和C型又可進一步分為B1、B2、B3、B4以及C1和C2亞型。中國大陸已發現的7株EV71病毒(SHZH03、SHZH98、SH2F1、SH2F2、SH2H25、SH2H26和CHN287)與EV71病毒C基因型代表株比較，同源性在89.3％～94.6％之間，較為接近，而與A、B基因型代表株比較，則同源性在81.3％～84.0％之間。說明中國大陸的10株EV71病毒皆屬于EV71病毒C基因型。?

EV71的病毒顆粒為球形結構，無包膜和突起，病毒粒子的衣殼組成非常復雜，首先由EV71病毒基因組編碼4個外殼蛋白，VP1、VP2、VP3暴露在病毒的表面，通過拼裝成原聚體和亞單位，最終形成病毒外殼。蛋白VP4則包埋在病毒外殼內側起連接作用。?

VP1、VP2和VP3三個多肽暴露在病毒外殼的表面，其抗原表位主要集中于VP1、VP2和VP3上。VP1不但具有顯著的基因多態性，而且集中了中和抗原決定簇，直接影響病毒的抗原性。VP1基因序列不僅可作為腸道病毒屬內不同血清型分類的依據，并可作為小RNA病毒科內不同屬的分類參考，因此VP1基因是EV71分子流行病學主要的研究內容。?

外殼蛋白VP1由891個核苷酸組成，存在著EV71主要中和抗原表位。?因此通過基因工程獲得該抗原的表達蛋白，并用其作為抗原檢測EV71的特異性IgM抗體。?

目前，手足口病的診斷，除了依據臨床癥狀外，實驗室診斷是不可缺如的環節。實驗室的診斷標準如下：?

1)血液檢查的細胞總數一般正常或偏高，分類時淋巴細胞較高，中性粒細胞較低。2)有中樞神經系統并發癥時，腦脊液細胞數可增多，蛋白升高。3)發病后從糞便、咽喉漱口液分離或檢測到相關病毒。4)從腦脊液或皰疹液分離或檢測到相關病毒。5)從早期血清中檢測出相關病毒IgM抗體。6)恢復期血清中和抗體比急性期有≥4倍的增長。?

然而到目前為止，還沒有一種能夠方便、快捷檢測腸道病毒71型的檢測方案的報道。?

發明內容

(一)、要解決的技術問題?

發明的目的是提供一種使用方便、快捷，用于檢測腸道病毒71型(EV71)的試紙條，檢測人類中腸道病毒71型(EV71)特異性抗原，用于腸道病毒71型(EV71)的輔助診斷。?

(二)、技術方案?

本發明提供了一種檢測試紙條，它包含以下成分：?

(1)包被腸道病毒71型特異性抗原VP1的單克隆抗體或多克隆抗體和質控二抗IgG兩個條帶的反應膜；?

(2)含有膠體金標記腸道病毒71型特異性抗原VP1的單克隆抗體的結合物釋放墊。?

上述二抗可以是抗鼠IgG二抗，所述反應膜可以是硝酸纖維素膜，所述結合物釋放墊可以是玻璃纖維膜。?

本發明檢測試紙條可以按如下方法制備：?

1)制備腸道病毒71型特異性抗原VP1的單克隆抗體或多克隆抗體；?

2)將步驟1)制備的腸道病毒71型特異性抗原VP1的單克隆抗體或多克隆抗體以及二抗IgG在反應膜上分別形成檢測帶和質控帶，備用；?

3)用膠體金標記腸道病毒71型特異性抗原VP1的單克隆抗體，包被到結合物釋放墊中；?

4)將制備好的反應膜以及結合物釋放墊與樣本墊、吸水墊和反應支持物組裝成試紙條。?

本發明還公開了所述試紙條在檢測腸道病毒71型(EV71)中的應用。?

本發明通過采用純化的腸道病毒71型(EV71)特異性抗原VP1的單克隆抗體或多克隆抗體和抗鼠IgG分別固相于硝酸纖維膜上(NC膜)，結合膠體金標記的腸道病毒71型(EV71)特異性抗原VP1的單克隆抗體，應用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測標本中的腸道病毒71型(EV71)。?

(三)、有益效果?