[發明專利]一種篩選、識別干細胞的試劑盒及其應用

無效

• 申請號: 201110149665.5
• 申請日: 2011-05-25
• 公開（公告）號: CN102796700A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 李福生;盧磊磊;盧淼淼;盧晶晶
• 申請（專利權）人: 李福生;盧磊磊
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C12N5/095;G01N33/53;C12Q1/02;A61L27/38;A61K35/12;A61K35/24;A61K35/42
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技術領域

本發明涉及一種篩選、識別嚙齒動物、人類或其他哺乳動物干細胞的試劑盒及其應用。

背景技術

?眾所周知，干細胞具有下述特征：1)長期的自我更新能力；2)能夠產生高度分化的其它種類細胞；3)本身處于未分化狀態；4)一般處于慢周期或靜息狀態；5)組織中處于相應的小生境(niches)內。

干細胞包括胚胎干細胞(Embryonic?stem?cells，ESCs)和成體干細胞(Adult?Stem?Cells，ASCs)，胚胎干細胞是全能性的，在理論上于體內可以再生身體內幾乎任意組織，但由于其一方面在獲取的倫理、道德等方面遇到了問題，另一方面其在應用上遇到了較為嚴重的問題，例如移植的胚胎干細胞可控性差，有生長為腫瘤的風險，并且其在移植受體后將會受到受體免疫系統的排斥等等，從而限制了其應用。

鑒于胚胎干細胞研究及應用所遇到的上述問題，科學家期望通過核編程的方式讓成體細胞能夠回到類胚胎干細胞的狀態，經過幾十年的研究，終于，在2006年日本科學家山中伸彌(Yamanaka?S，Cell，2006.126(4)：663-676，日本專利2008-131577)采用四個誘導因子Oct4、nanog、sox2等導入正常人成纖維細胞內，成功重編程其為類胚胎干細胞，被稱為誘導多潛能干細胞(induced?pluripotent?stem?cells，iPSCs)，該細胞具有類似人類胚胎干細胞的特性，它雖然與胚胎干細胞相似，具有能分化成生物體內所有組織的潛力，但是Lowry和Plath發現(Lowry等，CellStemCell，2009.5(1)：111-123)，當進行分子標簽比較的時候，胚胎干細胞中某些基因的表達明顯與iPS細胞不同，與胚胎干細胞相比，iPS細胞研究仍有問題亟待解決，例如iPSCs具更高基因畸變頻率(Loring等，Cell?StemCell，2011.8(1)：106-118)、致瘤性風險、編程效率低等等需要克服，因而，盡管研究人員取得了令人印象深刻的進展，要把細胞再編程用于治療疾病還需要更多一些突破。

成體干細胞是另外一類具有修復、再生、替代能力的未分化細胞類型，通常位于特定的小生境內，在受到外界損傷后，其會動員或者產生新的干細胞，通過增殖、分化的方式形成新的功能細胞，從而調節組織和器官細胞數量保持動態平衡。成體干細胞的多能性特點首先在骨髓中得到的成體干細胞得以發現。造血干細胞是目前研究的最為詳盡的成體干細胞之一，在過去近40年里一直是干細胞領域研究的主題，它們在體內進行自我更新的細胞分裂，在單細胞水平分化為所有的造血成份，并在機能上使得重度骨髓抑制的動物和人的骨髓得以恢復。

成體干細胞研究的基礎和其在臨床上的應用先決條件和最關鍵條件之一是對干/祖細胞的有效識別、篩選分離。最近越來越多的證據表明成體干細胞可見于多種成熟組織(Moore?KA，Science，2006.311(5769)：1880-1885)，并且很可能是由處于靜息態(細胞周期外且低代謝狀態)和激活(細胞周期內且不能保留DNA標記)態的干細胞共存(Li等，Science，2010.327(5965)：542-545)，但從成體中分離干細胞仍是極具挑戰性的任務，一方面在于其數量較少且更難于定位、篩選分離各種組織特異性干細胞，另外一方面在于缺少可靠的特異性分子標記物對其進行識別。

當前，主要有以下現有技術公開了如何得到相關的成體干細胞：

1)采用分子標志物篩選候選的干細胞，例如Thy-1^low或FLK2-Lineage^-Sca-1⁺c-Kit⁺分選造血干細胞群(Christemsen?JL等，PNAS，2001.98：14541-14546；Uchida?N等，Experimental?hematology，1996.24：649-659)，用CD14⁺免疫磁性分離的方法從外周血篩選新的干細胞群(PCT/055950干細胞的提純、識別及用途)用α₆^bri10G7^dim(LiA等，PNAS，1998.95(7)：3902-3907；Tani?H等，PNAS，2000.97(20)：10960-10965；Lavker?RM等，PNAS，2000.97(25)：13473-13475)識別人類、嚙齒動物來源的上皮干細胞，但其有效性還有待進一步證實；