[發明專利]抗環瓜氨酸肽抗體體外檢測試劑盒及制備方法

無效

• 申請號: 201110142351.2
• 申請日: 2011-05-30
• 公開（公告）號: CN102323402A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 朱曉敏;王泉龍;朱慧琳;劉穎成;楊杰;劉穎冰;張瑞鎬
• 申請（專利權）人: 上海精臻生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;G01N33/532
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 林煒

技術領域

本發明生物工程領域，尤其涉及一種試劑盒及其制備方法，特別是一種抗環瓜氨酸肽抗體定性體外檢測試劑盒及制備方法。

背景技術

類風濕性關節炎(Rheumatoid?Arthritis，RA)是一種慢性炎癥性、多關節受累的系統性自身免疫性疾病，RA的診斷目前采用1987年美國風濕病協會(ARA)修訂的分類標準，其中主要的實驗室指標是類風濕因子(RF)。2000年國外首次報道根據聚角蛋白微絲蛋白(Filaggrin)的cDNA序列合成了環瓜氨酸肽(Cyclic?Citrulinated?Peptide，CCP)，以此作為抗原建立酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，并成功地在RA血清中檢測出了抗CCP抗體，發現該抗體在RA的診斷中具有較高的敏感性和特異性。中小型醫院的類風濕關節炎患者就診人數量少，檢測樣品少，檢測報告周期長，容易延誤患者明確診斷和用藥治療。

發明內容

本發明的目的在于提供一種抗環瓜氨酸肽抗體體外檢測試劑盒及制備方法，所述的這種一種抗環瓜氨酸肽抗體體外檢測試劑盒及制備方法是采用膠體金滲濾法和層析法原理來檢測人血清中的抗環瓜氨酸肽抗體的濃度，解決了現有技術中檢測血清中的抗環瓜氨酸肽抗體濃度的時間較長，程序復雜的技術問題。

本發明提供了一種抗環瓜氨酸肽(CCP)抗體體外檢測試劑盒，包括檢測板、環瓜氨酸肽(CCP)抗原、由重組金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)標記的膠體金結合物、封閉液、洗滌液、陽性參考品和陰性參考品。

進一步的，所述的檢測板由一個塑料盒底盒，所述的塑料盒底盒中設置有一層吸水層，所述的吸水層上設置有一層硝酸纖維素膜，所述的硝酸纖維素膜上設置有一個塑料盒面蓋，所述的塑料盒面蓋中央設置有一個檢測反應孔，在檢測反應孔對應的硝酸纖維素膜上點加環瓜氨酸肽(CCP)抗原。

進一步的，所述的檢測反應孔為圓形或者其它形狀。

進一步的，所述的封閉液是含有牛血清白蛋白的磷酸鹽溶液，磷酸鹽溶液的pH7.0～7.5之間，牛血清白蛋白在磷酸鹽溶液中的重量百分比為1.0％。

進一步的，所述的洗滌液是含有Tween-20的Tris-HCl溶液，Tris-HCl溶液的pH7.0～7.5之間，Tween-20在Tris-HCl溶液中的重量百分比為0.05％。

進一步的，在每毫升膠體金結合物中，重組金黃色葡萄球菌A蛋白的質量為0.025毫克。

進一步的，所述的陽性參考品為濃度大于6.0RU/mL的抗CCP抗體。

進一步的，所述的陰性參考品為濃度小于6.0RU/mL的抗CCP抗體。

本發明還提供了上述的一種抗環瓜氨酸肽(CCP)抗體體外檢測試劑盒的制備方法，包括一個制備檢測板的步驟，一個配制環瓜氨酸肽(CCP)抗原溶液的步驟，一個制備膠體金標記的重組金黃色葡萄球菌A蛋白結合物的步驟，一個配制封閉液的步驟，一個配制洗滌液的步驟，一個制備陽性參考品的步驟和一個制備陰性參考品的步驟。

本發明的工作原理是：本試劑盒采用間接法免疫吸附法原理用以檢測人血清中的抗CCP抗體。將CCP抗原包被于硝酸纖維素膜，制成固相抗原，用以捕獲人血清中可能存在的抗CCP抗體。再將SPA標記于膠體金，形成膠體金結合物作為示蹤物。如被測人血清中含有抗CCP抗體，則形成固相抗原-抗CCP抗體-膠體金結合物，呈紅色斑點反應，其顏色深淺與被測血清中含有的抗CCP抗體的濃度有關，但不呈比例關系。

本發明和已有技術相比，其技術進步是顯著的。本發明的抗環瓜氨酸肽(CCP)抗體間接捕獲法原理及膠體金滲濾或膠體金層析檢測技術定性體外檢測試劑盒，用以檢測人血清中的抗CCP抗體，其中的瓜氨酸肽是有18個多肽組成，無生物毒性。本發明可以用于檢測人血清樣本中抗環瓜氨酸肽(CCP)抗體濃度，作為類風濕性關節炎(RA)輔助診斷使用。采用本發明的試劑盒當天能收到檢測報告，檢測結果準確而且方便。

附圖說明

圖1顯示了檢測板反應孔中心檢測點有紅色斑點，為陽性結果。

圖2顯示了檢測板反應孔中心檢測點無紅色斑點，為陰性結果。

具體實施方式

實施例1膠體金制備條件選擇

1.1檸檬酸三鈉用量選擇

A組：0.05％氯化金溶液100毫升加入5％檸檬酸三鈉2.0毫升。

B組：0.05％氯化金溶液100毫升加入5％檸檬酸三鈉1.5毫升。

C組：0.05％氯化金溶液100毫升加入5％檸檬酸三鈉1.0毫升。