[發(fā)明專利]一種利用噴霧干燥法制備抗仔豬腹瀉卵黃抗體微膠囊的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110115330.1
• 申請(qǐng)日: 2011-05-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102205122A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-10-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳健敏;謝彬;梁安莉;劉文娟;覃紹敏;陳鳳蓮;黃紅梅;馬玲;白安斌;袁書智
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所;廣西南寧惠朋動(dòng)物藥品有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): A61K39/395
• 分類號(hào): A61K39/395;A61K9/50;A61P31/04;A61P31/12;A61P1/12
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 劉小萍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種利用噴霧干燥法制備抗仔豬腹瀉卵黃抗體微膠囊的方法。

發(fā)明背景

仔豬腹瀉是引起仔豬死亡和生長(zhǎng)受阻的主要因素之一，已經(jīng)嚴(yán)重危害了我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。引起仔豬腹瀉的病原很多，主要有產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌(ETEC)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、輪狀病毒等。特異性卵黃抗體治療和預(yù)防由細(xì)菌和病毒引起的腸道疾病，具有安全無(wú)殘留、不產(chǎn)生抗藥性、成本低和服用方便的優(yōu)點(diǎn)，作為一類可替代抗生素的高效生物制劑在治療和預(yù)防仔豬腹瀉中的作用受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。但傳統(tǒng)方法制備得到的特異性卵黃抗體容易受到胃酸和胃蛋白酶的破壞，影響其功效。

目前，尚未見(jiàn)有關(guān)利用噴霧干燥法制備抗仔豬腹瀉卵黃抗體微膠囊的研究和應(yīng)用的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種利用噴霧干燥法制備抗仔豬腹瀉卵黃抗體微膠囊的方法，該方法制得的微膠囊可以保護(hù)卵黃抗體不受胃酸和胃蛋白酶的破壞，使卵黃抗體能夠到達(dá)腸道并釋放出來(lái)發(fā)揮功效。

本發(fā)明利用噴霧干燥法制備抗仔豬腹瀉卵黃抗體微膠囊的方法是按以下工藝步驟進(jìn)行操作：

1)、用含K88、K99和987P三種血清型，且每一種菌的菌數(shù)至少30億CFU/mL的大腸桿菌滅活苗和豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉及輪狀病毒三聯(lián)弱毒苗免疫健康雞群各三次，每次免疫間隔20天，兩種免疫間隔10天，最后一次免疫隔10天后收獲高免卵；

2)、用0.1％的新潔爾滅浸泡高免卵，消毒30min，再用75％酒精進(jìn)行蛋殼表面消毒，然后采集卵黃液，并采用水稀釋法提取卵黃中的水溶性蛋白；

3)、再采用飽和硫酸銨法去除水溶性蛋白中的雜蛋白，獲得高純度的卵黃抗體，并將卵黃抗體濃度調(diào)至10mg/mL；

4)、將質(zhì)量百分濃度為2～6％的明膠溶液、質(zhì)量百分濃度為0.5～1％的海藻酸鈉溶液及步驟3)獲得的卵黃抗體按體積比為50∶50∶1混合，再加入終濃度為0.5～1％的吐溫80，在溫度50～70℃、攪拌速度1000～2000rpm及攪拌時(shí)間15～60min的條件下進(jìn)行乳化制得成囊乳化液；

5)、將步驟4)獲得的成囊乳化液采用噴霧干燥法制得微膠囊成品，噴霧干燥的條件為：進(jìn)風(fēng)溫度160～180℃、進(jìn)料速度5～15ml/min、干燥時(shí)間5～15s及出口溫度60～80℃。

本發(fā)明方法采用噴霧干燥法與微膠囊成囊技術(shù)相結(jié)合，使制得的微膠囊可以保護(hù)卵黃抗體不受胃酸和胃蛋白酶的破壞，而且使卵黃抗體能夠到達(dá)腸道并釋放出來(lái)發(fā)揮功效，是一種可替代抗生素防治仔豬腹瀉的高效環(huán)保生物制劑。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明方法作進(jìn)一步的描述：

實(shí)施例1：

按以下工藝步驟制備抗仔豬腹瀉卵黃抗體微膠囊：

(1).用含K88、K99和987P三種血清型、且每一種菌的菌數(shù)均在30億CFU/mL以上的大腸桿菌滅活苗按1mL/只免疫200只健康雞，共三次，每次間隔20天。在每次免疫大腸桿菌滅活苗后10天接著免疫豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉及輪狀病毒三聯(lián)弱毒苗，按0.5mL/只免疫，共三次，每次間隔20天。最后一次免疫隔10天后收獲高免卵約250kg；

(2).用質(zhì)量百分濃度為0.1％的新潔爾滅浸泡步驟(1)收獲的卵，消毒30min，再用質(zhì)量百分濃度為75％酒精進(jìn)行蛋殼表面消毒，無(wú)菌條件下打開(kāi)蛋殼，使卵清與卵黃分開(kāi)，再將卵黃置于滅菌濾紙上滾動(dòng)，吸掉殘留卵清后刺破卵黃膜收集卵黃液。再用滅菌水將卵黃液做10倍稀釋，攪勻，并調(diào)PH至5.5，靜置過(guò)夜，再在4℃、轉(zhuǎn)速為10000rpm/min離心30min，收集上清液；

(3).在步驟(2)收集的上清液中加入等體積的PBS(0.01mol/L，PH6.8)進(jìn)行稀釋，再加入飽和硫酸銨溶液，使其體積占總體積的1/2，再在4℃下靜置1h，在4℃、轉(zhuǎn)速為5000rpm/min離心20min，棄上清液。再用2倍步驟(2)中上清液體積的PBS(0.01mol/L，PH6.8)溶解沉淀，再加入飽和硫酸銨溶液，使其體積占總體積的1/3，再在4℃、轉(zhuǎn)速為5000rpm/min離心20min，棄上清液。再用PBS(0.01mol/L，PH6.8)溶解沉淀，得到濃度為10mg/mL、純度為88％的卵黃抗體約500ml。