[發(fā)明專利]一種腫瘤壞死因子受體1前配體裝配域綴合物的結(jié)構(gòu)及用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110095850.0
• 申請日: 2011-04-18
• 公開（公告）號: CN102206267A
• 公開（公告）日: 2011-10-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚文兵;曹進(jìn);孟芳;田浤;高向東
• 申請（專利權(quán)）人: 中國藥科大學(xué)
• 主分類號: C07K14/715
• 分類號: C07K14/715;A61K38/17;A61K47/48;A61P19/02;A61P29/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種腫瘤壞死因子受體1前配體裝配域蛋白綴合物。

背景技術(shù)

腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族的胞外區(qū)主要負(fù)責(zé)與配基的識(shí)別與結(jié)合，它們的胞外區(qū)通常含有1至6個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域(CRD)。這些受體通常以三聚體結(jié)合配體，發(fā)揮受體功能。而上述功能則是由含有至少1個(gè)富含半胱氨酸的前配體裝配域所介導(dǎo)。TNFR超家族成員，包括TRAIL受體1、CD40、TNFR1和TNFR2都具備這種締合功能。Fas、LTβR、HVEM、RANK、CD40、CD30、CD27、OX40和DR4等其它TNFR超家族成員均含有此前配體裝配域。

研究發(fā)現(xiàn)，在缺少配基的情況下，PLAD對受體聚合體的形成是必須且充分的。雖然PLAD不直接參與對TNFα和TNFβ的識(shí)別與結(jié)合，但刪除PLAD或PLAD發(fā)生突變，配體與受體的親和能力會(huì)喪失。因此，PLAD對于TNFR多聚體的形成以及配基結(jié)合相關(guān)，在TNF相關(guān)信號傳導(dǎo)途經(jīng)中起著至關(guān)重要的作用。TNFR超家族成員是通過預(yù)先形成的聚合體而不是通過配體誘導(dǎo)的單個(gè)受體亞基的交聯(lián)來傳遞信號的，因此PLAD可以被靶向封閉以阻斷這些聚合體的形成并因此阻斷受體功能。PLAD的發(fā)現(xiàn)以及其介導(dǎo)的配基非依賴型受體組成功能的闡明為相關(guān)疾病的治療提供了新思路和新靶點(diǎn)。

目前上市的以TNFα或者TNFR為靶點(diǎn)的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的生物藥物有Infliximab(英夫利昔)、Adalimumab(阿達(dá)木單抗)和Etanercept(依那西普)等。其中英夫利昔和阿達(dá)木單抗是TNFα的單抗，而依那西普是可溶性TNFR和Fc片段的融合蛋白。TNFα單抗和TNFR融合蛋白都可以結(jié)合過量的可溶性TNFα，從而抑制TNFα引發(fā)的信號傳導(dǎo)通路。但是由于這種以TNFα為靶點(diǎn)的治療方法不能區(qū)分多種TNFR通路，比如不能區(qū)分TNFα和TNFR1和TNFR2的結(jié)合，所以在抑制TNFR1引起的疾病時(shí)也會(huì)抑制TNFR2介導(dǎo)的生理作用，從而可能引起多種副作用，如狼瘡樣綜合癥(lupus-like?disease)、分枝桿菌感染以及淋巴瘤發(fā)生率的增加。

如果以PLAD為靶點(diǎn)，使用PLAD或其功能性突變體等封閉TNFR的PLAD區(qū)，可以特異性地抑制某種TNFR的聚合，從而終止TNFR-TNF復(fù)合物的形成，達(dá)到終止信號傳導(dǎo)的目的。由于每種受體只和自身的PLAD區(qū)結(jié)合，因此這種結(jié)合具有特異性。比如使用TNFR1的PLAD干擾TNFR1的功能的同時(shí)，可以避免對TNFR2生理功能的影響，從而避免副作用的產(chǎn)生。

聚乙二醇(PEG)是一類無免疫原性、無毒、水溶性好的聚合大分子，聚乙二醇修飾技術(shù)是現(xiàn)在被廣泛應(yīng)用于改善蛋白質(zhì)生物有效性和理化性質(zhì)的方法。修飾了聚乙二醇的蛋白質(zhì)分子由于可以降低其被蛋白酶的降解程度、減少腎小球?yàn)V過率、增大蛋白的水溶性和降低蛋白質(zhì)分子的免疫原性，因此可以被賦予更好的生物和理化特性，擴(kuò)大蛋白質(zhì)和多肽的應(yīng)用范圍。其中，由于PEG分子長鏈的柔性以及其較大的分子量，PEG修飾后的蛋白質(zhì)在體內(nèi)的體內(nèi)半衰期可以得到有效延長，延緩其體內(nèi)的清除時(shí)間，并且可以有效改善蛋白質(zhì)的生物分布。目前，F(xiàn)DA已批準(zhǔn)多種PEG修飾的蛋白質(zhì)類藥物進(jìn)入生物醫(yī)藥應(yīng)用領(lǐng)域，如PEG修飾的腺苷脫氨酶(PEG-ADA)、天冬酰胺酶(PEG-L-asparaginase)、干擾素α-2b(peginterferon?alfa-2b)、干擾素α-2a(peginterferon?alfa-2a)、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(pegfilgrastim)等。