[發明專利]一種生產豬α-干擾素的純化方法無效
| 申請號： | 201110082331.0 | 申請日： | 2011-04-01 |
| 公開（公告）號： | CN102732587A | 公開（公告）日： | 2012-10-17 |
| 發明（設計）人： | 王偉穎;閆亮亮;劉桂蘭 | 申請（專利權）人： | 瑞普（天津）生物藥業有限公司 |
| 主分類號： | C12P21/02 | 分類號： | C12P21/02;C07K14/56;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/16;C12R1/84 |
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| 地址： | 300300 天*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 生產 干擾素 純化 方法 | ||
1.一種生產豬α-干擾素的純化方法，步驟包括：
(1)重組菌株進行發酵；
(2)6000rpm，15min離心發酵液取上清，通過微濾除雜、超濾濃縮；
(3)用醋酸調節濃縮液pH至5，并過陽離子層析柱(CM?Sepharose柱層析)，收集0.45mol/L的目標洗脫峰；
(4)加入硫酸銨30％(W/V)至稍混濁，6000rpm，10min離心取上清；
(5)過Sephacryl?S-200層析柱，通過SDS-PAGE檢測收集目標洗脫峰；
(6)過Sephadex?G-75色譜柱，通過SDS-PAGE檢測收集目標洗脫液，置于4℃保存。
2.如權利要求1所述的一種生產豬α-干擾素的純化方法，其特征在于所述的步驟(5)在實施之前，先去熱原，用50mmol/L，pH5.5的醋酸緩沖液平衡，上樣。
3.如權利要求2所述的一種生產豬α-干擾素的純化方法，其特征在于去熱原的方法為凝膠過濾法。
4.如權利要求1所述的一種生產豬α-干擾素的純化方法，其特征在于所述的步驟(6)在實施之前，將充分浸泡后的Sephadex?G-75凝膠裝入色譜柱中，去熱原，用10mmol/L、pH7.0的PBS緩沖液平衡，上樣。
5.如權利要求4所述的一種生產豬α-干擾素的純化方法，其特征在于去熱原的方法為凝膠過濾法。
6.如權利要求1所述的一種生產豬α-干擾素的純化方法，其特征在于所述的重組菌株為畢赤酵母工程菌。
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