[發(fā)明專利]一種表達(dá)有機(jī)磷水解酶的重組菌株、復(fù)合酶制備工藝、復(fù)合酶制劑及果蔬洗滌劑

無(wú)效

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• 申請(qǐng)日: 2011-03-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102199550A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭永超;劉牧龍;王艷平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳西德賽科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/15
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/55;C12N15/56;C12N15/60;C12N15/63;C12N9/16;C12N9/36;C12N9/88;C11D7/42;C11D3/386
• 代理公司: 深圳市順天達(dá)專利商標(biāo)代理有限公司 44217
• 代理人: 易釗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，涉及一種表達(dá)有機(jī)磷水解酶的重組菌株、復(fù)合酶制備工藝、復(fù)合酶制劑及果蔬洗滌劑。

背景技術(shù)

農(nóng)藥是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中必須的生產(chǎn)資料，全世界的化學(xué)農(nóng)藥品種大約為14000多種，年產(chǎn)量以以原料藥計(jì)達(dá)300萬(wàn)噸。我國(guó)是高毒農(nóng)藥的生產(chǎn)大國(guó)，其中有機(jī)磷農(nóng)藥的使用占整個(gè)農(nóng)藥的57％，農(nóng)藥的殘留會(huì)造成環(huán)境和食品的嚴(yán)重污染，而且污染面廣，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，嚴(yán)重影響了人們的身體健康及農(nóng)產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯，引起越來(lái)越多社會(huì)的廣泛關(guān)注。

如何有效地處理農(nóng)藥殘留問(wèn)題，確保果蔬農(nóng)藥殘留符合食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，涉及每位公民的生命健康。果蔬農(nóng)藥殘留治理技術(shù)是食品安全生產(chǎn)的關(guān)鍵配套技術(shù)，目前主要的方法有清水洗滌浸泡或洗滌劑清洗。但是一般農(nóng)藥都是脂溶性，在水中的溶解度很小，因此清水洗滌一般不能得到滿意的洗滌效果。而一般的化學(xué)洗滌劑雖然可以一定程度上減少農(nóng)藥殘留，但是會(huì)帶來(lái)二次污染，同時(shí)會(huì)對(duì)果蔬的營(yíng)養(yǎng)成分造成一定程度的破壞，因此開(kāi)發(fā)高效、經(jīng)濟(jì)、安全的農(nóng)藥殘留處理方法已經(jīng)成為亟待解決的具有重要經(jīng)濟(jì)和社會(huì)意義的研究方向。

生物降解酶是一種水解酶，極易溶于水，這種生物酶是源于土壤中的一些微生物，如細(xì)菌、真菌和放線菌等所產(chǎn)生出的一種酶，它能特異性地水解有機(jī)?磷農(nóng)藥分子上的磷酸酯鍵，將有機(jī)磷農(nóng)藥分解，分解后的有機(jī)磷農(nóng)藥已經(jīng)不是磷酸酯類(lèi)化合物，從而完全消除了農(nóng)藥的毒性。因?yàn)槊副旧砭褪堑鞍踪|(zhì)，被廣泛應(yīng)用于食品添加劑和釀酒等，不會(huì)像化學(xué)合成洗滌劑那樣如使用不當(dāng)還會(huì)造成對(duì)人體有害的二次污染。生物降解酶法不但高效而且很安全，無(wú)毒無(wú)副作用，對(duì)果蔬的口味和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值也沒(méi)有絲毫的影響，可以直接適用于各種水果、蔬菜、茶葉、谷物、豆類(lèi)、蛋奶和肉類(lèi)。

目前，科學(xué)家已將多種來(lái)自于微生物的農(nóng)藥降解酶分離、純化，并對(duì)其進(jìn)行深入的生理和生化研究，現(xiàn)正致力于凈化農(nóng)藥殘留污染的實(shí)際運(yùn)用和工業(yè)化生產(chǎn)的研究和開(kāi)發(fā)。但由于農(nóng)藥降解酶在天然原始酶珠中的含量太低，很難實(shí)現(xiàn)工業(yè)化廉價(jià)生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，針對(duì)現(xiàn)有有機(jī)磷水解酶工藝的不足，提供一種表達(dá)有機(jī)磷水解酶的重組菌株、復(fù)合酶制備工藝、復(fù)合酶制劑及果蔬洗滌劑。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：

構(gòu)造一種表達(dá)有機(jī)磷水解酶的重組菌株，其中，所述重組菌株內(nèi)還含有可控裂解酶基因。

本發(fā)明所述的重組菌株，其中，所述裂解酶為噬菌體裂解酶或溶菌酶。

本發(fā)明所述的重組菌株，其中，采用下述方法獲得所述重組菌株：

將有機(jī)磷水解酶表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到可控裂解的宿主菌；

或者，將含有有機(jī)磷水解酶基因和可控裂解酶基因雙順?lè)醋拥谋磉_(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌；

或者，將有機(jī)磷水解酶表達(dá)質(zhì)粒和可控裂解酶表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化宿主菌。

本發(fā)明所述的重組菌株，其中，所述宿主菌為細(xì)菌或真菌，所述細(xì)菌至少包括大腸桿菌，所述真菌至少包括酵母菌。

本發(fā)明還提供了一種應(yīng)用前述任一項(xiàng)所述的重組菌株的復(fù)合酶制備工藝，包括以下步驟：

A、對(duì)表達(dá)有機(jī)磷水解酶的重組菌株進(jìn)行培養(yǎng)，加入適當(dāng)?shù)膯?dòng)條件誘導(dǎo)表達(dá)裂解酶；

B、將所述培養(yǎng)液離心直接取上清，獲得復(fù)合酶溶液；

或者，將所述培養(yǎng)液離心收集細(xì)胞后用緩沖液重懸，再經(jīng)凍融后離心取上清，獲得復(fù)合酶溶液；

或者，將所述培養(yǎng)液離心收集細(xì)胞后用裂解緩沖液重懸處理，再經(jīng)離心取上清，獲得復(fù)合酶溶液。

本發(fā)明所述的復(fù)合酶制備工藝，其中，所述步驟A中，所述適當(dāng)?shù)膯?dòng)條件是指：

升高溫度至37～45℃處理1～6小時(shí)，或加入誘導(dǎo)試劑處理1～6小時(shí)；

所述誘導(dǎo)試劑為阿拉伯糖或異丙基硫代半乳糖苷。

本發(fā)明還提供了一種采用前述復(fù)合酶制備工藝制備的復(fù)合酶制劑，其中，包括有機(jī)磷水解酶和細(xì)胞裂解酶。

本發(fā)明所述的復(fù)合酶制劑，其中，還包括陰離子表面活性劑、甘氨酸、碳酸氫鈉、Tris堿、乙二胺四乙酸、氯化鈉和羧甲基纖維素中的一種或者多種組合；

所述復(fù)合酶制劑以凍干粉、泡騰片或液體形式包裝。

本發(fā)明所述的復(fù)合酶制劑，其中，所述有機(jī)磷水解酶占復(fù)合酶制劑總重量?的百分比為0.00001％～80％，所述細(xì)胞裂解酶占復(fù)合酶制劑總重量的百分比為0.00001％～80％。

本發(fā)明還提供了一種果蔬洗滌劑，其中，包括前述任一項(xiàng)所述的復(fù)合酶制劑。