[發(fā)明專利]黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110062947.1
• 申請日: 2011-03-16
• 公開（公告）號: CN102109518A
• 公開（公告）日: 2011-06-29
• 發(fā)明（設計）人: 李培武;張道宏;張奇;張文;管笛;丁小霞;姜俊
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 胡建平

1.黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條，其特征在于：包括紙板，紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線，所述檢測線包被有黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶聯(lián)物，質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體；所述金標墊橫向噴涂有納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體，所述抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體由保藏號為CCTCC?NO.?C201018的雜交瘤細胞株2C9產(chǎn)生。

2.根據(jù)權利要求1所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條，其特征在于：所述的吸水墊長16～18mm，寬2～4mm；檢測墊長25～30mm，寬2～4mm；金標墊長6～9mm，寬2～4mm；樣品墊長12～18mm，寬2～4mm，相鄰各墊的交疊長度為1～3mm。

3.根據(jù)權利要求1所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條，其特征在于：所述檢測墊上的檢測線與硝酸纖維素膜上沿的間距為15～20mm，質控線和檢測線的間距為5～10mm。

4.根據(jù)權利要求1所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條，其特征在于：所述檢測墊上每厘米檢測線所需的黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶聯(lián)物的包被量為75～375ng；每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為50～500ng。

5.根據(jù)權利要求1所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條，其特征在于：所述金標墊中所用的納米金的粒徑為15～20nm；所述金標墊上每厘米噴涂長度所需的納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體的用量為200～600ng。

6.根據(jù)權利要求1或2所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)吸水墊的制備

將吸水紙剪裁即得吸水墊；

(2)檢測墊的制備

檢測線的包被：

將黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白的偶聯(lián)物配制成0.1～0.5mg/mL的包被液A；于距離硝酸纖維素膜上沿為15～20mm的位置，用點噴方式將包被液A橫向包被于硝酸纖維素膜上得到檢測線，每厘米檢測線上所需黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白的偶聯(lián)物(AFM1-BSA)的包被量為75～375ng，然后于37～40℃條件下干燥5～20分鐘；

質控線的包被：

將兔抗鼠多克隆抗體配制成0.1～0.5mg/mL的包被液B；于距檢測線5～10mm的位置，用點噴方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到質控線，每厘米質控線上所需兔抗鼠多克隆抗體的包被量為50～500ng，然后于37～40℃條件下干燥5～20分鐘；

(3)樣品墊的制備

將玻璃纖維膜放入封閉液A中浸濕，取出，于37～40℃條件下干燥4～10小時，得樣品墊，然后置干燥器中室溫保存；

(4)金標墊的制備

將玻璃纖維膜放入封閉液B中浸濕，取出，于37～40℃條件下干燥4～10小時，于已干燥的玻璃纖維膜上，用點噴方式將納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體溶液橫向進行噴涂，每厘米噴涂長度所需納米金標記的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體為200～600ng，然后真空冷凍干燥2～6h，置干燥器中室溫保存；

所述的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體由保藏號為CCTCC?NO.?C201018的雜交瘤細胞株2C9產(chǎn)生；

(5)試紙條的組裝

在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，交疊長度為1～3mm，即得黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條。

7.根據(jù)權利要求6所述的黃曲霉毒素M1免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：所述的包被液A是按照下述方法配制得到的：將10～50mg市售黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶聯(lián)物(AFM1-BSA)，1～2g牛血清白蛋白，0.02～0.05g疊氮化鈉，0.8g氯化鈉，0.29g十二水磷酸氫二鈉，0.02g氯化鉀，0.02g磷酸二氫鉀，加水定容至100mL所得；

所述的包被液B是按照下述方法配制得到的：將10～50mg兔抗鼠多克隆抗體，0.02～0.05g疊氮化鈉，0.8g氯化鈉，0.29g十二水磷酸氫二鈉，0.02g氯化鉀，0.02g磷酸二氫鉀，加水定容至100mL所得。