[發明專利]重組β淀粉樣肽B細胞表位多肽嵌合抗原、其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201110053130.8
• 申請日: 2011-03-04
• 公開（公告）號: CN102180971A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發明（設計）人: 余云舟;孫志偉;王雙;仇瑋祎
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K38/17;A61K39/00;A61P25/28
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術領域

本發明涉及生物制藥和基因工程技術領域，具體涉及重組β淀粉樣肽B細胞表位多肽嵌合抗原、其制備方法和應用。

背景技術

阿爾茨海默病(Alzheimer’s?disease，AD)是一種以認知功能障礙和記憶減退為主要臨床特征的神經退行性疾病，是老年癡呆的主要形式。最新統計顯示全世界大約有2700萬人受到AD的影響，而我國的AD患者高達1000萬，并且每年以30萬的速度增長，給社會和家庭造成了沉重的經濟負擔。目前臨床上治療AD的藥物主要有乙酰膽堿酯酶抑制劑和NMDA(N-甲基-D-天冬酰胺)拮抗劑等，但是這些藥物只能減輕患者的癥狀，卻不能有效治療AD。

淀粉樣蛋白級聯假說(Amyloid?cascade?hypothesis)被認為是AD的致病機制。淀粉樣肽(β-amyloid，Aβ)由淀粉樣前體蛋白(β-amyloid?precursor?protein，APP)經β-分泌酶和γ-分泌酶剪切加工后生成，裂解為具有40、42或43個氨基酸的淀粉樣肽(Aβ)分子，具有自我聚合的能力，因而能夠在細胞外聚集成寡聚體，導致纖維化進而形成淀粉樣沉積。而阿爾茨海默病就是由于患者大腦內堆積了過多的Aβ，產生了神經毒性，直接導致了神經元功能的障礙及減退，或進而導致tau蛋白的過度磷酸化而產生神經纖維纏結，間接導致神經元功能的減退。目前人們普遍認為，過多的Aβ是誘發AD發病機制的核心，是AD形成和發展的關鍵；所以，以淀粉樣肽(Aβ)為靶標，研制疫苗阻斷或清除Aβ堆積，是預防和治療阿爾茨海默病(AD)的一種有效策略。

1999年，Schenk等首次報道了利用人纖維化的Aβ42多肽聯合弗氏佐劑免疫AD轉基因小鼠(Tg2576)(參見Schenk?D，et?al.，Nature，1999，400：173-7)。此后，Elan和Wyeth采用Aβ42進行了臨床試驗，但在II?a期臨床試驗中，6％的受試者出現了急性腦膜炎，從而導致實驗終止(參見Orgogozo?JM，et?al.，Neurology，2003，61：46-54)。大多數人認為，出現腦膜炎的原因是產生了Th1型細胞免疫反應(參見Cribbs?DH，et?al.，Int?Immunol，2003，15：505-14)。盡管如此，那些治療后產生針對Aβ的抗體的患者相比未接受治療的患者，認知能力下降的速度明顯減緩(參見Hock?C，et?al.Neuron，2003，38：547-54)。因此，只要避免免疫治療后的有害副作用，以Aβ為靶標的主動免疫方法治療阿爾茨海默病還是十分有希望的。經過分析得知，Aβ1～42當中存在一個B細胞表位(第1～15位)及兩個T細胞表位(第17～21和29～42位)。這個重要發現使人們研究AD主動免疫時更傾向于使用單獨B細胞表位，并去除有害的T細胞表位，讓疫苗達到促進抗體生成的目的，且從根本上避免之前臨床試驗所產生的Th1型細胞不良反應。基于以上研究結果，結合AN-1792疫苗在病人體內應用失敗的原因，愛爾蘭的Elan和美國的?惠氏公司合作開發了一種新疫苗ACC-001，目前該疫苗正進行II期臨床試驗。ACC-001以白喉毒素突變體(CRM197)為載體蛋白，體外偶聯Aβ多肽序列N端，以QS21作為佐劑。同時，Novartis公司制備的CAD106疫苗(Aβ多肽序列N端連接Qb顆粒)，Affiris公司制備的Affitope疫苗(用一段短多肽模擬天然Aβ序列的一部分作為抗原成分)，以及Merck公司制備的V950(Aβ多肽序列N端連接ISCOMATRIX)也正在進行I或II期臨床試驗。最近，基于Aβ表位的阿爾茨海默病DNA和重組病毒載體疫苗也得到了研究。除此之外，也可設計重組的免疫原作疫苗來治療阿爾茨海默病；如Moretto等報道了重組Aβ多肽蛋白疫苗，利用大腸桿菌表達包含Aβ的重組蛋白Trx-4/8Aβ(1～15)，獲得的重組蛋白經純化后免疫小鼠，產生了良好的免疫反應，可作為候選疫苗，但該重組蛋白抗原含有Trx蛋白不能夠應用于人類，需要進一步優化改選(參見Moretto?N，et?al.，JBiological?Chemistry，2007，282：11436-45)。