[發明專利]一種用于中國倉鼠卵巢細胞的培養基

有效

• 申請號: 201110051952.2
• 申請日: 2011-03-04
• 公開（公告）號: CN102653729A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發明（設計）人: 陳智勝
• 申請（專利權）人: 上海賽金生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 張睿

技術領域

本發明涉及細胞培養領域。更具體地，本發明涉及用于中國倉鼠卵巢細胞(Chinese?Hamster?Ovary，CHO)細胞培養的培養基和相應的培養方法。

背景技術

真核細胞中CHO(Chinese?Hamster?Ovary，中國倉鼠卵巢細胞)細胞是目前重組糖基蛋白生產的首選體系；因為與其他表達系統相比，它具有許多優點。目前已有越來越多的藥用蛋白在CHO細胞中獲得了高效表達，其中許多CHO表達的藥物已投放市場，例如EPO、Enbrel等。

目前在CHO細胞培養中廣泛使用的是無血清培養基，因為含有動物血清的培養基有多種不利因素。由于無血清培養基對于細胞的生長、表達的促進功能有限，所以補料技術現在已經成為各大生物制藥企業競爭的重點之一。

CHO細胞常用的培養模式有分批培養、流加培養、連續培養和灌注培養，操作模式的選取對產物的表達有重要的影響。一般在反應器操作中可根據目的產品的特性和要求以及細胞株的特點來選擇不同的操作模式。早期生物反應器大規模培養CHO細胞時常采用的方法是分批培養。目前，藥物蛋白生產廣泛采用的是流加式培養(Fed-batch?culture)。流加式培養是在分批培養基礎之上改進的，先將一定量的培養液裝入反應器，接種細胞進行培養，在細胞不斷生長過程營養物質不斷消耗，代謝產物的不斷堆積，在對數生長期的一定時機向系統中補充新的營養成分，使細胞進一步生長代謝，直到整個培養結束后取出產物。目前已獲FDA批準的生物技術產品以及公開發表的生產工藝中，占有主流優勢的是流加或灌注培養。

國際和國內有很多人開發了各種CHO培養基和補料配方，如：國內華東理工大學張立、張元興等人發明的CHO培養基(專利申請號：200410018258.0)。國際上有商業出售的培養基，如JRH?Biosciences公司是專業從事細胞培養基產品(cell?culture?media)的公司，是美國FDA指定生物醫藥企業專用培養基。Invitrogen公司也出品無血清培養基，但是大規模的進行抗體藥物蛋白質表達需要的培養基量很大，費用昂貴，比如JRH基礎培養基的價格在每升100元人民幣以上，在成本中占很大比例，在我國，蛋白藥物廠家也面臨著培養基的巨額費用的問題，而且同時蛋白產量低也是一個很大的問題。

因此，本領域迫切需要開發新的適合CHO細胞培養的、高蛋白產量的無血清培養基。

發明內容

本發明的目的就是提供一種新的培養CHO細胞的培養基，也提供了一種CHO細胞的培養方法。

在本發明的第一方面，提供了一種用于中國倉鼠卵巢細胞的基礎培養基，以所述基礎培養基的總體積計，所述基礎培養基含有以下基本成份：

6-6.5g/L氯化鈉；

0.5-0.5g/L氯化鉀；

0.462-1g/L丙酮酸鈉；

0.288-0.4g/L硝酸鈣；

1.464-2g/L碳酸氫鈉；

5.16-15g/L?D-葡萄糖；和

0.156-0.7g/L磷酸氫二鈉。

在另一優選例中，所述的基礎培養基還含有10-54g/L氨基酸、1.2-7.0g/L微量元素、0.3-1.6g/L維生素、和3-10g/L酵母抽提物；所述的微量元素包括Cu、Fe、Zn、Mg、Mn、Ni、Na、Se、V、Mo、Sn、和Si；所述的維生素包括氯化膽堿、乙醇胺、DL-α-硫辛酸、I-肌醇、核黃素、硫胺、氰鈷胺素、D-泛酸鹽、D-生物素、葉酸、煙酰胺、對氨基苯甲酸、腐胺、和吡哆醇。

在另一優選例中，在本發明提供的基礎培養基中，所述的氨基酸(g/L)是：

在另一優選例中，在本發明提供的基礎培養基中，所述的微量元素(g/L)是：

在另一優選例中，在本發明提供的基礎培養基中，所述的維生素(g/L)是：

在另一優選例中，所述的基礎培養基中還含有以下物質(g/L)：

HEPES，FA?????????????????????????4-6

普盧蘭尼克F-68，NF????????????????1-2

亞油酸????????????????????????????0.0003528-0.00206388

酵母抽提物????????????????????????3-10。