[發明專利]一種裂褶菌的培養方法

無效

• 申請號: 201110046585.7
• 申請日: 2008-12-30
• 公開（公告）號: CN102172172A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 周瑩;李興紅;嚴紅;燕繼曄;盧娜
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 胡長遠

本申請是申請號為：200810247561.6、申請日為2008年12月30日、發明名稱為《裂褶菌蛋白提取物及其制備方法和應用》的專利申請的分案申請。

技術領域

本發明屬于植物病害防治領域，具體地說涉及裂褶菌蛋白提取物及其制備方法和應用；此外，還涉及裂褶菌的培養方法和培養基。

背景技術

植物病毒病類似人類的癌癥，目前尚無十分有效的防治方法。煙草花葉病毒(Tobacco?mosaic?virus，TMV)是最具經濟重要性的病毒之一，能侵染茄科、葫蘆科、十字花科等300多種植物，并引起嚴重危害，植物病毒病防治通常依靠育種和化學藥劑的方法解決，但效果都不理想，前者受限于抗病基因的來源，后者則效果差，同時會造成環境污染等問題。近年來，隨著人們對環境的重視，化學藥劑的應用受到了限制，而環境友好型的生物源抗植物病毒藥劑受到重視。

裂褶菌(Schizophyllum?communeFr)又稱白參、樹花，屬于真菌門，擔子菌亞門、層菌綱、非褶菌目、裂褶菌科、裂褶菌屬。裂褶菌廣布于世界各地，我國大部分地區都有分布。近年來，日本及歐美等國主要從分子生物學、抗癌活性物質和優良菌株的選育等方面對裂褶菌進行研究，我國的研究則集中于裂褶菌的發酵條件、人工馴化栽培和藥用價值。裂褶菌中含有多種抗菌消炎、抗腫瘤，抗輻射等活性物質，但其應用研究多集中在醫學領域，而在抗植物病毒方面的作用未涉及到。

專利《裂褶菌的培養工藝及其利用》(專利號ZL85103492)公開了用黃豆粉、葡萄糖或蔗糖、酵母膏、硫酸鎂、磷酸二氫鉀等組成的培養基培養裂褶菌的方法，提高菌絲體及裂褶多糖的得率，并從裂褶菌中提取抗腫瘤、抗放升白及調整機體免疫功能、生產抗菌素增效劑的裂褶菌多糖和人體必需的氨基酸。在這種液體培養工藝下，每升發酵菌液含200-300g菌絲體(濕重)，但是其產量仍然較低。

發明內容

本發明第一目的是提供一種能防治煙草花葉病毒的裂褶菌蛋白提取物。

本發明第二目的是提供上述裂褶菌蛋白提取物的制備方法。

本發明第三目的是提供裂褶菌的培養方法。

本發明第四目的是提供用于培養裂褶菌的培養基。

本發明第五目的是提供裂褶菌蛋白提取物在防治煙草花葉病毒上的用途。

實現本發明的技術方案如下：

裂褶菌蛋白提取物，按照如下方法制備：

(1)按照重量體積比為1∶10～20的比例將裂褶菌菌絲粉與pH?7.0～9.0的磷酸緩沖液(PBS)混合，然后在2～6℃浸提1～3h，再在4℃、7000～10000rpm條件下離心15～25min，收集上清液，得到裂褶菌粗提液；

(2)向步驟(1)所得裂褶菌粗提液中加入硫酸銨至飽和度為40％，然后在2～6℃放置6～12小時，再在4℃、7000～10000rpm條件下離心15～25min，收集上清液；

(3)向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為85％，然后在2～6℃放置6～12小時，再在4℃、7000～10000rpm條件下離心15～25min，所得沉淀即為裂褶菌蛋白提取物。

上述裂褶菌蛋白提取物的制備方法，包括如下步驟：

(1)按照重量體積比為1∶10～20的比例將裂褶菌菌絲粉與pH?7.0～9.0的磷酸緩沖液(PBS)混合，然后在2～6℃浸提1～3h，再在4℃、7000～10000rpm條件下離心15～25min，收集上清液，得到裂褶菌粗提液；

(2)向步驟(1)所得裂褶菌粗提液中加入硫酸銨至飽和度為40％，然后在2～6℃放置6～12小時，再在4℃、7000～10000rpm條件下離心15～25min，收集上清液；

(3)向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為85％，然后在2～6℃放置6～12小時，再在4℃、7000～10000rpm條件下離心15～25min，所得沉淀即為裂褶菌蛋白提取物。

所述的裂褶菌菌絲粉的粒徑為≤60目。

上述裂褶菌蛋白提取物中所述的裂褶菌的培養方法，包括如下步驟：

(1)裂褶菌母種活化：將裂褶菌母種轉接在PDA固體培養基上，然后在24～28℃培養7～10天，得平板活化菌絲；