[發明專利]日本蟳Jassr129微衛星DNA標記的檢測方法

有效

• 申請號: 201110043717.0
• 申請日: 2011-02-19
• 公開（公告）號: CN102162010A
• 公開（公告）日: 2011-08-24
• 發明（設計）人: 劉萍;李健;宋春妮
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101
• 代理人: 楊秉利

1.一種日本蟳Jassr129微衛星DNA標記的檢測方法，其特征在于，操作程序為：首先提取日本蟳基因組DNA并稀釋備用；再利用日本蟳基因組文庫中的Jass?r129微衛星核心序列，在其序列兩端設計特異性引物；然后使用該引物對日本蟳不同地理群或群內個體的基因組DNA進行PCR擴增，對PCR產物進行變性聚丙烯酰胺凝膠檢測；利用產物出現的條帶進行分析，確定每個個體的基因型，從而獲得日本蟳在Jassr129核心序列區高度遺傳變異的多態性圖譜；Jassr129微衛星核心序列的特異性引物序列分別為：正鏈5’-CATTACGCTCGGAAAGTG-3’，負鏈3’-TTCAGCAGCACAACCTCT-5’，使用該引物時的退火溫度為49℃。

2.按照權利要求1所述的日本蟳Jassr129微衛星DNA標記的檢測方法，其特征在于，提取日本蟳基因組DNA，將其稀釋為50ng/μL，每個PCR反應中加入3μL，反應總體積為20μL。

3.按照權利要求1或2所述的日本蟳Jassr129微衛星DNA標記的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增的加樣參數為：每個PCR反應總體積為20μL，包括50ng日本蟳基因組DNA3μL；含15mmol/L?Mg²⁺的10X?PCR?Buffer2.0μL；2.5mmol/L?dNTP?1.6μL；5U/μL的Taq0.2μL；本發明的引物10mmol/L各1μL；最后加ddH₂O至20μL；使用該引物時設置PCR儀的程序參數為：95℃預變性5min；95℃變性45s，49℃退火45s，72℃延伸45s，35個循環；最后72℃再延伸10min；4℃保存。

4.按照權利要求1或2所述的的日本蟳Jassr129微衛星DNA標記的檢測方法，其特征在于，對PCR產物的檢測：將PCR產物在6％的變性聚丙烯酰胺凝膠，12W恒功率電泳1～1.5h進行分離；將膠板通過10％的冰醋酸溶液20min→蒸餾水6min→0.1％的硝酸銀溶液25min→3％的碳酸鈉溶液顯色數分鐘，終止反應即可得到日本蟳在Jassr129基因座位高度遺傳變異的多態性圖譜。

5.按照權利要求3所述的的日本蟳Jassr129微衛星DNA標記的檢測方法，其特征在于，對PCR產物的檢測：將PCR產物在6％的變性聚丙烯酰胺凝膠，12W恒功率電泳1～1.5h進行分離；將膠板通過10％的冰醋酸溶液20min→蒸餾水6min→0.1％的硝酸銀溶液25min→3％的碳酸鈉溶液顯色數分鐘，終止反應即可得到日本蟳在Jassr129基因座位高度遺傳變異的多態性圖譜。