[發明專利]一種蘭科植物菌根菌絲團和淀粉同時染色的方法

無效

• 申請號: 201110042054.0
• 申請日: 2011-02-22
• 公開（公告）號: CN102181511A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發明（設計）人: 桂陽;朱國勝;劉作易
• 申請（專利權）人: 貴州省果樹科學研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 顧書玲;程新敏

技術領域

本發明涉及菌根染色技術領域，特別是涉及一種蘭科植物菌根菌絲團和淀粉同時染色的方法。

背景技術

蘭科植物與真菌長期共生，形成菌根結構，菌根真菌以菌絲團的形式存在于根皮層細胞中。菌根真菌與宿主互惠互利，在碳水化合物方面相互交換。因此從細胞學角度研究菌根真菌與宿主碳水化合物的關系，對理解菌植共生關系非常重要。一般采用碘液對淀粉進行染色，染色成藍色或紫紅色，用甲苯胺藍、酸性品紅等對真菌組織染色。在植物菌根方面，對菌根真菌的染色一般用酸性品紅乳酚油、苯胺藍等。

在蘭科植物菌根生長的某個階段，植物根貯藏的淀粉和菌絲團同時存在于同一細胞中，不易區分。目前，對該階段中淀粉和菌絲團的觀察都是采用單染色法，只能對菌根真菌或淀粉進行染色，而不能同時清楚觀察到菌絲團和淀粉。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術不能同時觀察菌根中的菌絲團和淀粉的缺陷，提供一種能同時染色菌絲團和淀粉的方法。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下的技術方案：

本發明蘭科植物菌根菌絲團和淀粉同時染色的方法：取菌根切片，置于載玻片上，滴加水合氯醛碘液染料，染色后吸走多余的染料，再滴加苯胺藍甘油乳酸液染料，染色后吸走多余的染料，置于光學顯微鏡下顯微觀察，菌根中的淀粉呈現深棕色、真菌菌絲團呈現藍色；其中：

水合氯醛碘液染料是由水合氯醛80～120g、碘化鉀4～6g、碘1～2g和去離子水80～120ml配制而成；

苯胺藍甘油乳酸液染料是由乳酸8～12ml、甘油18～22ml、水溶性苯胺藍0.03～0.05g和去離子水8～12ml配制而成。

進一步的，前述染色方法為：取健康菌根，洗凈，切片，將菌根片置于載玻片上，滴加水合氯醛碘液染料2～3滴，染色8～10秒，用濾紙吸走多余的染料，再滴加苯胺藍甘油乳酸液染料1～2滴，染色5～6秒，用濾紙吸走多余的染料，置于光學顯微鏡下顯微觀察，菌根中的淀粉呈現深棕色、真菌菌絲團呈現藍色；其中：

水合氯醛碘液染料是由水合氯醛100g、碘化鉀5g、碘1.5g和去離子水100ml配制而成；

苯胺藍甘油乳酸液染料是由乳酸10ml、甘油20ml、水溶性本案立案0.04g和去離子水10ml配制而成。

前述染色方法中所用到的水合氯醛碘液染料的配制方法為：取碘化鉀和碘，放入洗凈的燒杯中，加入去離子水溶解，然后加入水合氯醛，溶解，保存在棕色瓶中備用。

前述染色方法中所用到的苯胺藍甘油乳酸液染料的配制方法為：取水溶性苯胺藍，放入洗凈的燒杯中，加入去離子水溶解，然后加入乳酸、甘油，混合后放入滴瓶中備用。

采用上述技術方案進行染色，可將蘭科植物菌根中的淀粉染成深棕色、真菌菌絲團染成藍色（如圖1和圖2所示），而如果染色順序相反或者將兩種染色液混合后進行染色，菌絲團都不能染成藍色。

與現有技術相比，本發明的技術方案成功對菌根中的菌絲團和淀粉同時染色，能同時觀察到菌根真菌在蘭科植物根中的定殖特點和淀粉的分布特征，對揭示菌根真菌的消解、形成與宿主碳水化合物的積累、消解的關系有重要意義。

附圖說明

圖1是放大到100倍的菌根染色照片；

圖2是放大到400倍的菌根染色照片；

圖中，深棕色的是被染色的淀粉，藍色是被染色的菌絲團。

具體實施方式

下面結合具體實施方式詳細說明本發明的技術方案。

首先配制染料，具體配制方法如下：

水合氯醛碘液染料：?準確稱量1.5g碘、5g碘化鉀，放入洗凈的燒杯中研和，加100ml去離子水水溶解，然后加入100g水合氯醛混合，溶解，即得，保存在棕色瓶中備用。

苯胺藍甘油乳酸液染料：準確稱量0.04g水溶性苯胺藍，放入洗凈的燒杯中，加入10ml去離子水，攪拌溶解，再加入10ml乳酸、20ml甘油，混合，即得，放入滴瓶中備用。

染色方法：

1、取蘭科植物健康的乳白色根，在自來水下洗凈根外塵土；

2、用徒手切片法切片，選取薄而完整的切片放在載玻片上備用；

3、滴加2～3滴水合氯醛碘液染料于載玻片的切片上，染色8～10秒，用濾紙吸走多余的染料；

4、然后在載玻片切片上滴加苯胺藍甘油乳酸液染料1～2滴，染色5～6秒，用濾紙吸走多余的染料；

5、將帶有染色后切片的載玻片置于光學顯微鏡下顯微觀察，可以清楚地觀察到同一細胞中的淀粉呈現深棕色、而菌根真菌菌絲團呈現藍色，如圖1和圖2所示。