[發明專利]基于微流控芯片快速檢測分析阿米巴抗體的方法及其應用

無效

• 申請號: 201110041607.0
• 申請日: 2011-02-21
• 公開（公告）號: CN102645543A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 隋國棟;程訓佳;劉思秀;趙望;章黎;付永鋒
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N35/00
• 分類號: G01N35/00;G01N33/96
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種基于微流控芯片快速檢測分析阿米巴抗體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將抗溶組織內阿米巴抗體泵入微流控芯片的分析室；

（2）泵入填料體積的溶組織內阿米巴蛋白溶液，溶組織內阿米巴抗原與聚合微球填料結合；

（3）將含有5%牛白蛋白的磷酸鹽緩沖液泵入微流控芯片分析室；

（4）待檢血清經稀釋后，泵入微流控芯片的分析室，血清中的抗溶組織內阿米巴抗體特異性與聚合微球上的重組溶組織內阿米巴蛋白結合；

（5）將標記的抗人抗體泵入微流控芯片的分析室；

（6）由信號采集模塊采集數據，并采用軟件分析阿米巴抗體。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）的抗溶組織內阿米巴抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的抗溶組織內阿米巴抗體抗天然溶組織內阿米巴蛋白抗體、重組溶組織內阿米巴蛋白抗體或重組融合溶組織內阿米巴蛋白的標簽的抗體。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的抗溶組織內阿米巴抗體抗重組溶組織內阿米巴蛋白抗體。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）的微流控芯片由樣品富集及免疫分析模塊、信號采集模塊和芯片的系統控制模塊組成；

其中，

所述的樣品富集及免疫分析模塊由并行的一個或幾個單獨的納升體積的免疫色譜柱微分析室組成，每個分析室連接有多個進樣空和出樣口，每個分析室通過聚合填料鍵合固定抗體蛋白或抗原；

所述的信號采集模塊由紫外LED和熒光光敏器件陣列組成；

所述的芯片的系統控制模塊中，硬件部分主要由控制部分、操作系統和數據采集、數據分析部分組成，軟件部分主要包括LABVIEW程序和ImagePro程序。

6.根據權利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述的微流控芯片采用PDMS高分子聚合材料制備。

7.根據權利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述的微流控芯片的分析室為整體柱或聚合填料灌柱。

8.根據權利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述的聚合填料為硅膠填料或有機聚合微球。

9.根據權利要求1或5所述方法，其特征在于，所述的微流控芯片的分析室單獨或連接使用。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）的重組溶組織內阿米巴蛋白選自溶組織內阿米巴的260kDa?Gal/GalNAc可抑制性凝集素、150kDa?Gal/GalNAc可抑制性凝集素，或上述兩種分子的多肽片段。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）的重組溶組織內阿米巴蛋白為150kDa?Gal/GalNAc可抑制性凝集素的C末端多肽片段。

12.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟（2）的重組溶組織內阿米巴蛋白為標簽融合蛋白，其選自組氨酸殘基組成的融合標簽、Flag標簽、MBP標簽、GST標簽、HA標簽蛋白、C-Myc?標簽蛋白、AviTag標簽、SNAP-Tag或HaloTag?標簽。

13.根據權利要求12所述方法，其特征在于，所述步驟（2）的重組溶組織內阿米巴蛋白為組氨酸殘基組成的融合標簽。

14.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（5）的標記的抗人抗體為羊抗人抗體。

15.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述的抗人抗體的標記為酶標抗體或熒光標記抗體。