[發明專利]膠體金層析法抗Ro52抗體檢測試紙及其制備方法

有效

• 申請號: 201110032362.5
• 申請日: 2011-01-28
• 公開（公告）號: CN102621315A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 韓永俊;高成秀;張玥;葛文斌;孫宏彬;錢杰
• 申請（專利權）人: 上海科新生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

1.膠體金層析法抗Ro52抗體檢測試紙，包括有樣品墊(1)、結合墊(2)、硝酸纖維素包被膜(3)、吸水墊(6)，所述樣品墊(1)、結合墊(2)、硝酸纖維素包被膜(3)、吸水墊(6)由底板(7)的一側依次向所述底板(7)的另一側相互搭接粘貼在所述底板(7)上，其特征在于：

所述的結合墊(2)包被有金標抗體a和金標抗體b；

所述的硝酸纖維素包被膜(3)上設置有檢測線(4)和質控線(5)，所述的檢測線(4)包被有Ro52抗原蛋白，所述的質控線(5)包被有金標抗體c。

2.根據權利要求1所述的膠體金層析法抗Ro52抗體檢測試紙，其特征在于：所述金標抗體a中的抗體A為抗人IgG單克隆抗體、抗人IgG多克隆抗體、葡萄球菌A蛋白(SPA)、鏈球菌G蛋白(Protein?G)中的一種或多種。

3.根據權利要求2所述的膠體金層析法抗Ro52抗體檢測試紙，其特征在于：所述的抗人IgG多克隆抗體為鼠源、馬源、羊源、兔源或豚鼠源中的一種；所述的抗人IgG單克隆抗體為鼠源或兔源中的一種。

4.根據權利要求1所述的膠體金層析法抗Ro52抗體檢測試紙，其特征在于：所述金標抗體a中的抗體A為葡萄球菌A蛋白。

5.根據權利要求1所述的膠體金層析法抗Ro52抗體檢測試紙，其特征在于：所述的金標抗體b中的抗體B和金標抗體c中的抗體C同時或不同時為單克隆抗體或多克隆抗體中的一種，其中金標抗體b中的抗體B和金標抗體c中的抗體C可發生特異性結合形成免疫復合物。

6.根據權利要求5所述的膠體金層析法抗Ro52抗體檢測試紙，其特征在于：所述的多克隆抗體為鼠源、馬源、羊源、兔源或豚鼠源中的一種，所述的單克隆抗體為鼠源或兔源中的一種。

7.根據權利要求1所述的膠體金層析法抗Ro52抗體檢測試紙，其特征在于：所述的檢測線上包被的Ro52抗原蛋白為通過原核表達克隆化基因獲得的Ro52抗原蛋白。

8.一種膠體金層析法抗Ro52抗體檢測試紙的制備方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

步驟1，硝酸纖維素包被膜的制備

(1)Ro52抗原蛋白的制備，通過原核表達克隆化基因獲得Ro52抗原蛋白；

(2)金標抗體c的制備：用0.1M碳酸鉀調節膠體金pH?7.0～9.0，按每毫升膠體金溶液緩慢加入4～25μg抗體C，攪拌10～30min，然后加入BSA至終濃度0.5～5％，攪拌10～30min，離心，棄上清，將沉淀用洗滌液洗滌2～3次，末次用十分之一初始體積的保存液將沉淀重懸，置4℃備用；

(3)硝酸纖維素包被膜的制備，用包被膜緩沖液稀釋步驟(1)制備的Ro52抗原蛋白至濃度為0.5～1.5mg/mL，包被于硝酸纖維素包被膜的檢測線上；用包被膜緩沖液稀釋將抗體c稀釋到0.8～2.0mg/mL，以1～10μl/cm包被于硝酸纖維素膜的質控線上，硝酸纖維素包被膜制備好以后置放于37℃烘干備用；

步驟2，結合墊的制備

(1)金標抗體a的制備：用0.1M碳酸鉀調節膠體金pH?7.0～9.0，按每毫升膠體金溶液緩慢加入4～25μg抗體A，攪拌10～30min，然后加入BSA至終濃度0.5～5％，攪拌10～30min，離心，棄上清，將沉淀用洗滌液洗滌2～3次，末次用十分之一初始體積的保存液將沉淀重懸，置4℃備用；

(2)金標抗體b的制備：用0.1M碳酸鉀調節膠體金pH?7.0～9.0，按每毫升膠體金溶液緩慢加入4～25μg抗體B，攪拌10～30min，然后加入BSA至終濃度0.5～5％，攪拌10～30min，離心，棄上清，將沉淀用洗滌液洗滌2～3次，末次用十分之一初始體積的保存液將沉淀重懸，置4℃備用；

(3)結合墊的制備：經處理液浸漬處理的聚脂膜，烘干后，將金標抗體a和金標抗體b混合后，以0.5～4μl/cm的用量噴涂在預處理的聚脂膜上，25℃～37℃干燥后得結合墊，結合墊置于2℃～8℃的環境下備用；

步驟3，樣品墊的制備

將玻璃纖維膜經處理液浸漬處理后制成樣品墊，樣品墊于37℃烘干后備用；

步驟4，在底板上順次相互搭接粘貼經前述步驟1-3所制作完成的硝酸纖維素包被膜、結合墊、樣品墊和吸水墊；

步驟5，對步驟4所制作完成的材料，切割成試紙條。