[發(fā)明專利]一種人血小板源性生長因子A同源二聚體及其生成方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110009024.X
• 申請日: 2011-01-17
• 公開（公告）號: CN102154305A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳東海;李洪波;金守光;徐愛民;李侍武
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/81;C07K14/49;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;胡杰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及應用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)基因工程蛋白藥物技術(shù)，具體來說涉及到一種高效生產(chǎn)人血小板源性生長因子A同源二聚體，以及該方法得到的人血小板源性生長因子A同源二聚體。

背景技術(shù)

成熟的血小板源性生長因子(PDGF)是由2條肽鏈構(gòu)成的以二硫鍵相連接的同源或異源二聚體，是相對分子量約為30kD的糖蛋白。PDGF是由A、B、C、D四個亞基通過二巰鍵相互聚合形成二聚體。在機體內(nèi)，PDGF含有五種異構(gòu)體：PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、PDGF-CC和PDGF-DD。PDGF的半衰期很短(小于2min)，在機體血清內(nèi)含量很低。PDGF主要是通過自分泌或旁分泌作用，與細胞膜上特異的受體相結(jié)合，將胞外信號傳遞到細胞內(nèi)。

PDGF主要來源于血小板，在人體中發(fā)揮著十分重要的生物學功能，目前認為它在損傷修復、胚胎發(fā)育中具有重要作用，并可能參與了動脈粥樣硬化、血管再狹窄、某些惡性腫瘤的發(fā)生。PDGF能誘導創(chuàng)面血管平滑肌細胞的遷移和內(nèi)皮細胞增殖、遷移并促進微血管的再生，有利于組織的供氧；可以促進成纖維細胞增殖，增加細胞外基質(zhì)成分，以利于組織的收縮；能促進角質(zhì)形成細胞的增殖與遷移，有助于創(chuàng)面的再上皮化。PDGF在細胞(包括膠質(zhì)細胞)的增殖中起著關(guān)鍵作用，PDGF-A對雄性小鼠生殖系統(tǒng)的發(fā)育起著決定性的作用，提示PDGF-A對于生殖系統(tǒng)某些疾病的診斷和治療可能具有重要意義。

人PDGF-A基因位于7號染色體，由7個外顯子組成，外顯子1編碼信號肽序列，外顯子2和3編碼可被高爾基復合體胞內(nèi)加工去除的前體序列，外顯子4和5編碼生長因子結(jié)構(gòu)域，外顯子6編碼C’-端序列，在蛋白成熟過程中可被加工去除，外顯子7基本不編碼。PDGF-A存在兩種剪接體，含有或不含有外顯子6編碼序列。人血小板源性生長因子A剪接體2，其信號肽包含二十個氨基酸殘基，成熟單體蛋白由110個氨基酸殘基組成，理論分子量約為13KDa，在體內(nèi)經(jīng)糖基化修飾后，該蛋白的分子量約為34KDa。

在國外住院的糖尿病人中，該病占47％，國內(nèi)占8％-12％，是糖尿病致殘的首要原因。瑞典、馬來西亞、印度尼西亞等國的截肢率為48-49.18％，美國約占50％，每年因該病4萬余人被截肢。國內(nèi)也有報道為38.1％-75％，截肢后死亡率也很高。PDGF可以有效治療糖尿病下肢潰瘍。PDGF(BB)為有效成份的處方藥已得到美國FDA的批準并于1997年用于臨床治療糖尿病下肢潰瘍。利用釀酒酵母為宿主菌，表達人重組PDGF(BB)蛋白，以該重組蛋白為有效成份，強生公司開發(fā)出名為Gel的處方藥膏，連續(xù)涂用該藥膏20周，糖尿病下肢潰瘍治愈率超過50％，極大地減少了因患該病而截肢的風險，是目前治療該病最有效的藥物之一。我國是糖尿病患者大國，有超過9000萬的糖尿病患者，其中并發(fā)該病的患者約占糖尿病患者總數(shù)的1％，近1/3的并發(fā)癥患者因得不到有效治療而不得不選擇截肢。PDGF-AA在糖尿病下肢潰瘍傷口愈合的早期發(fā)揮非常重要的功能，能大大促進對糖尿病下肢潰瘍的治療效果。

PDGF除在治療糖尿病下肢潰瘍表現(xiàn)出顯著的療效外，在其它一些疾病的治療上也具有十分重要的價值。如，在骨折發(fā)生后，PDGF通過促進骨折區(qū)域細胞的增殖、分化對骨折的愈合及在許多生理病理過程中起重要的調(diào)控作用，對促進臨床骨折早期愈合預防骨愈合的延遲有重要臨床價值；PDGF的正常表達對于神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和成熟起著重要的作用，臨床上可望用其來治療神經(jīng)系統(tǒng)有發(fā)育缺陷的病人；PDGF-A對于生殖系統(tǒng)的發(fā)育具有重要意義。