[發明專利]量子點標記過氧化氫酶熒光探針的制備方法

有效

• 申請號: 201110006683.8
• 申請日: 2011-01-13
• 公開（公告）號: CN102169090A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: 周培疆;陳馳;何振宇;史廣宇
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明涉及量子點的生物應用，更具體涉及一種CdTe量子點標記過氧化氫酶熒光探針的制備方法，該探針可用于檢測污染物、毒物與酶的作用效應。

背景技術

有機相合成的量子點不具備親水性，因此不能直接應用于生物體系，必須對其進行表面修飾，其操作過程復雜，條件要求高。水相合成法制備的量子點能夠直接用于生物探針，對其研究愈來愈受到重視，有關這方面的研究進展很快。但由于水相合成的量子點所選用的配體多為簡單的巰基化合物，表面的活性基團比較少且表面積很小，難以與目標物質結合，因此水相量子點的直接應用存在局限性。因此，將量子點與生物大分子結合既增大了量子點的表面積，又增加了量子點表面活性基團，克服了水相量子點的應用局限性。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種CdTe量子點標記過氧化氫酶熒光探針的制備方法，該制備方法工藝快速簡單，工藝參數易控制。該探針水溶性和生物相容性好，檢測功能應用廣泛，性價比高，在保持了過氧化氫酶（CAT）一定活性的同時，修飾了量子點表面，使其具有較高的熒光強度。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

其技術構思是：一種CdTe量子點標記過氧化氫酶熒光探針，它包括CdTe量子點（自制，請見A~E步驟）、過氧化氫酶(CAT，SIGMA-ALORICH)、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS，上海延長生化公司)、L-甘氨酸(Glycine，凌飛科技)，其余為Tris緩沖溶液。

所述的CdTe量子點中，氯化鎘(CdCl₂·2.5H₂O，國藥集團化學試劑有限公司)、碲氫化鉀(KTeH₄，請見A步驟)、巰基乙酸(TGA，Japan)的摩爾比率分別為?2.5：1：3，100℃條件下加熱10~20min。

所述的Tris緩沖溶液pH值為6.8-7.6。

一種CdTe量子點標記過氧化氫酶熒光探針的制備方法，其步驟如下：

A、????????????制備碲氫化鉀(KH₄Te)?溶液：通過硼氫化鉀(KBH₄，天津市天大化學試劑廠)還原碲粉(Te，國藥集團化學試劑有限公司)制備，反應方程式如下：

4KBH₄?+?2Te?+?7H₂O?→?2KH₄Te?+?K₂B₄O₇?+11H₂↑

分別稱取0.337g的硼氫化鉀(KBH₄)和0.319g的碲粉(Te)于具塞試管中。向硼氫化鉀(KBH₄)中加入5mL高純水，至白色粉末完全溶解，后與碲粉(Te)混合，塞上塞子，于3--5℃下反應8~16h，得紫黑色液體，取上清部分1ml，用無氧高純水定容至100ml，即為0.005mol/L的碲氫化鉀(KH₄Te)溶液；

B、稱取0.228g氯化鎘(CdCl₂·2.5H₂O)晶體，用高純水溶解定容至100mL，得0.01mol/L的氯化鎘(CdCl₂)溶液；

C、稱取0.092g巰基乙酸(TGA)，用高純水稀釋定容至100mL，得0.01mol/L的巰基乙酸(TGA)溶液。

D、取無氧高純水250mL，在中速攪拌和不斷通入高純氮氣（N₂）的條件下，依次分別加入50mL0.01mol/L的氯化鎘(CdCl₂)溶液、60mL0.01mol/L的巰基乙酸（TGA）溶液，用5mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液調節pH值為10.5~11.5，后加入40mL碲氫化鉀(KH₄Te)?溶液，反應4-6min。

E、將D步驟的混合液以每罐50ml分裝于聚四氟乙烯消解罐中，于100℃下微波加熱10-20min，即制得濃度為1?mmol/L?（以Cd²⁺計）CdTe量子點。氯化鎘(CdCl₂)、碲氫化鉀(KH₄Te)、巰基乙酸(TGA)的摩爾比率分別為?2.5：1：3。