[發明專利]轉基因玉米快速篩選試劑盒

無效

• 申請號: 201110002686.4
• 申請日: 2011-01-07
• 公開（公告）號: CN102191317A
• 公開（公告）日: 2011-09-21
• 發明（設計）人: 嚴衛星;李寧;賈旭東;張文眾;雍凌;劉玉梅
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心營養與食品安全所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：本發明是實現對食品中MON810、Bt11、NK603、59122和1507五種轉基因玉米快速篩選的試劑盒。

背景技術：目前食品中的轉基因成分檢測技術比較成熟，但是由于轉基因作物種類繁多，因此必須建立一種快速的篩選方法。在大力推進轉基因生物研發的同時，要同步發展其快速篩選技術，不斷優化食品中轉基因成分的檢測方法。因此，建立一種食品中轉基因成分的快速篩選試劑盒就很必要。

發明內容：本發明實現了食品中MON810、Bt11、NK603、59122和1507五種轉基因玉米的快速篩選。

(1)根據這五種轉基因玉米中導入的公共元件和功能元件設計出相應的具有相同PCR反應條件的引物。第一步初篩，同時對啟動子CaMV?35S、P-ract、Ubi?Zm1和終止子NOS、pinII共五種公共元件(初篩基因)進行PCR檢測，以初步確定食品中是否含有轉基因元件；第二步定位，同時對cp4epsps、pat、cry1F、cry1Ab、cry35Ab五種功能元件(定位基因)進行檢測。

(2)標準品：將快速篩選方法中的5個初篩基因CaMV?35S、P-ract、Ubi?Zm1、NOS、pin?II整合到一個質粒上形成“初篩質粒”，將5個定位基因cp4epsps、pat、cry1F、cry1Ab、cry35Ab整合到一個質粒上形成“定位質粒”，制成標準品，在檢測過程中作為陽性對照，對試劑盒進行質量控制，也可作為定量檢測的標準。質粒通過大腸桿菌轉染和培養而實現增殖。

(3)結果查詢軟件：根據篩選結果，結果查詢軟件可以單一查詢或者邏輯判斷檢測結果為哪種轉基因作物，以及該種作物的受體生物、新性狀、外源基因信息等基本信息。

本發明與現階段國內對轉基因作物的檢測手段相比，具有以下功能特點：(1)能夠同時對5種轉基因玉米進行檢測；(2)檢測時間短，只需兩個PCR步驟；(3)有配套的結果查詢軟件，縮短了對檢測結果進行判斷的時間；(4)有配套的標準品，可以對試劑盒進行有效的質量控制，并且可以作為熒光定量PCR檢測的標準。

具體實施方式：利用試劑盒中的反應體系、引物，直接加入待測樣品，通過兩步PCR程序進行檢測。將所得結果輸入結果查詢軟件，軟件自動給出受試物中可能存在的轉基因作物及其相關的受體生物、新性狀、外源基因等信息。還可以進行熒光定量PCR，根據標準品濃度算出待測物中外源基因的含量。

質粒轉染大腸桿菌的保存方式：取出菌液，按3∶1加入甘油，攪勻，液氮速凍，然后放入-70度超低溫冰箱，可保2年活力，需要使用時，冰上解凍，沾取菌液加到新培養基里活化培養。或直接放置于4℃冰箱保存兩天。

生物材料樣品保藏信息：?

保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；?

保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101；?

保藏日期：2010年10月20日；?

保藏編號：CGMCC?4228；?

分類命名：大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)。?