[發明專利]用于診斷不同亞型肺癌的基于組織的微-RNA方法

有效

• 申請號: 201080064794.8
• 申請日: 2010-12-24
• 公開（公告）號: CN102770561A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 吳瑩;盧韶華;黃威;朱虹光;李健
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;A61K31/7105;A61P35/00
• 代理公司: 北京永新同創知識產權代理有限公司 11376
• 代理人: 程大軍

發明領域

本發明涉及已經過證實的miRNA生物標記和相應的方法，以用于可靠地在外科手術和活組織檢查肺組織中組織中不同亞型的肺癌，特別是用于區別不同亞型的肺癌。所述肺癌亞型包括腺癌肺癌、鱗狀細胞肺癌和小細胞肺癌。

發明背景

肺癌依然是世界上男性和女性癌相關死亡中最常見的原因。據估計在2009年有約1400000新增病例，伴隨平均2.51%的年增長率(Frost&Sullivan估計)，這些在2009年診斷為肺癌15的患者絕大多數將會死于該疾病(Higgins,M.J.et?al.(2009)Expert?Rev?Anticancer?Ther?9,1365-1378)。盡管在過去的幾十年中外科技術和聯合治療有了一定的改進，但在美國和歐洲不同分期肺癌患者的總5年存活率僅約15%。

肺癌分類為小細胞肺癌(small?cell?lung?cancer，SCLC)或非小細胞肺癌(non-small?cell?lung?cancer，NSCLC)。主要的(80%)肺癌組織學類型為NSCLC包括腺癌和鱗狀細胞狀細胞癌。吸煙是發生肺癌的最重要風險因子，占世界范圍內男性肺癌病例中的80%和女性肺癌患者中的50%。

肺癌治療依不同的癌亞型而異。對早期NSCLC的治療選擇是外科手術，有40%的總5年存活率。但是，多數患者在診斷時已處于晚期，使得一線治療僅局限于多藥聯合化療而且預期存活率少于8個月。在靶向治療方面的近期進展要求對非小細胞肺癌(NSCLC)30更準確地亞型分類。癌血管生成抑制劑可使鱗狀細胞狀細胞癌患者更易于發生異常反應(Lebanoy,D.(2009)J?Clin?Oncol?27,2030-2037)。小細胞肺癌(SCLC)患者是肺癌中致死性最高的亞型，患者死亡率高于90%。盡管在早中期患者中常觀察到高初始反應率，中位存活率也有約20個月。但外科手術對SCLC的治療幾乎是無效的，化療或化療放療聯合才是治療選擇。

除了對不同亞型和不同病因肺癌的不同治療，監測者間的差異和缺乏特異、標準化的檢測也限制了當下對患者實施充分策略化合適治療的能力。對肺癌患者個體的治療決策很快將基于詳細的癌和宿主特征。用于區分肺癌亞型的特異性分子生物標記是絕對需要的。

許多診斷性檢測也受限于一般是基于對單一分子指標的分析，而這種分析可能影響檢測的可信度和/或準確性。此外，單一指標通常并不能對潛伏階段、癌進展等進行詳細預測的。因此，仍然需要發掘可供選擇的分子指標和檢測方式來克服這些局限。

解決這一問題的方法之一可以基于調控性RNA分子，特別是基于由20-25個核酸大小的進化保守的內源性表達的非編碼RNA，該類RNA可介導靶mRNA表達并以此自從其在10年前發現以來被證實參與細胞發育、分化、增殖和凋亡的微RNA(miRNA)(Bartel,D.P.(2004)Cell?116,281-297,Ambros,V.(2004)Nature?431,350-355;He,L.et?al.(2004)Nat?Rev?Genet?5,522-531)。而且，由于其在體外非常穩定和在體內的長期存在，miRNA有作為癌生物標記的其他mRNA所沒有的優勢(Lu,J.et?al.,(2005)Nature?435,834-838;Lim,L.P.et?al.,(2005)Nature?433,769-773)。

miRNA產生于原發轉錄并被RNase?III?Drosha加工成莖-環狀結構的前體(pre-miRNA)。轉運到細胞質后，另一名為Dicer的RNase?III剪切pre-miRNA發夾的環形成短雙鏈RNA，其中一條鏈以成熟miRNA整合成miRNA-蛋白質復合體(miRNP)。其中的miRNA引導miRNP到靶mRNA發揮功能(Bartel,D.P.(2004)Cell?23,281-292;He,L.and?Hannon,G.J.(2004)Nat?Rev?Genet?5,522-531)。

根據miRNA與其目標間的互補程度，miRNA可引導不同的調控過程。與miRNA高互補的mRNA通過與RNA干擾(RNAi)相同的機制被特異性剪切。因此，在這種情況下，miRNA作為短干擾RNA(siRNA)發揮功能。靶向與miRNA互補性較弱的mRNA要么被導向細胞降解途徑或在不影響mRNA水平的狀態下被翻譯抑制。但，miRNA如何抑制靶mRNA的翻譯機制仍有爭議。