[發明專利]用6-磷酸葡萄糖酸內酯酶(PGL)來增加異戊二烯及其他產物的產量的組合物和方法

無效

• 申請號: 201080064358.0
• 申請日: 2010-12-23
• 公開（公告）號: CN102906268A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: Z·Q·貝克;M·A·塞爾溫;A·T·尼爾森;C·M·派瑞斯
• 申請（專利權）人: 丹尼斯科美國公司;固特異輪胎和橡膠公司
• 主分類號: C12P5/00
• 分類號: C12P5/00;C12P7/00;C12N15/90
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 陳迎春;黃革生

1.一種能夠產生異戊二烯的大腸桿菌(E.coli)菌株的重組細胞或其子代，所述細胞包含：(a)編碼PGL多肽的異源核酸的一個或多個拷貝，其中所述核酸整合在所述大腸桿菌染色體中；以及(b)編碼異戊二烯合酶的一種或多種異源核酸；

其中在所述整合之前，所述大腸桿菌細胞不包含編碼PGL多肽的核酸，并且

其中所述所得的重組細胞產生的異戊二烯的滴度大于不包含(a)和(b)的相同細胞的該滴度。

2.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌細胞，其中編碼鉬攝取多肽的異源核酸的一個或多個拷貝被額外整合在所述大腸桿菌染色體中。

3.根據權利要求2所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述鉬攝取多肽選自modF、modE、modA、modB和modC。

4.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌細胞，其中編碼半乳糖代謝多肽的異源核酸的一個或多個拷貝被額外整合在所述大腸桿菌染色體中。

5.根據權利要求4所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述半乳糖代謝多肽選自galM、galK、galT和galE。

6.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌細胞，其中編碼半乳糖代謝多肽的異源核酸的一個或多個拷貝和編碼鉬攝取多肽的異源核酸的一個或多個拷貝被額外整合在所述大腸桿菌染色體中。

7.根據權利要求6所述的重組大腸桿菌細胞，其中(a)所述PGL多肽是大腸桿菌PGL多肽；(b)所述鉬攝取多肽選自modF、modE、modA、modB和modC；并且(c)所述半乳糖代謝多肽選自galM、galK、galT和galE。

8.根據權利要求7所述的重組大腸桿菌細胞，其中編碼所述PGL多肽、半乳糖代謝多肽和鉬攝取多肽的核酸是如圖20中所示17,257堿基對片段的一部分。

9.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述細胞產生異戊二烯的比產率高于不包含(a)和(b)的相同細胞的該比產率。

10.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述比產率為至少15mg/OD/h。

11.根據權利要求7所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述編碼PGL多肽、鉬攝取多肽和/或半乳糖代謝多肽的核酸來自大腸桿菌菌株K12MG1655或為大腸桿菌菌株K12MG1655的衍生物。

12.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述細胞屬于大腸桿菌菌株B。

13.根據權利要求12所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述細胞屬于大腸桿菌菌株BL21。

14.根據權利要求12所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述細胞屬于大腸桿菌菌株BL21(DE3)。

15.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌細胞，還包含(c)編碼甲羥戊酸(MVA)途徑上游的多肽和/或MVA途徑下游的多肽的異源核酸。

16.根據權利要求7所述的重組大腸桿菌細胞，還包含(d)編碼甲羥戊酸(MVA)途徑上游的多肽和/或MVA途徑下游的多肽的異源核酸。

17.根據權利要求15或16所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述MVA途徑上游的多肽選自：(i)乙酰乙酰基輔酶A合酶(硫解酶)多肽；(ii)3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶多肽；以及(iii)3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶多肽。

18.根據權利要求15或16所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述MVA途徑下游的多肽選自：(i)甲羥戊酸激酶(MVK)；(ii)磷酸甲羥戊酸激酶(PMK)；(iii)二磷酸甲羥戊酸脫羧酶(MVD)；以及(iv)異戊烯基二磷酸異構酶(IDI)。

19.根據權利要求16所述的重組大腸桿菌細胞，其中(a)所述PGL多肽是大腸桿菌PGL多肽；(b)所述鉬攝取多肽選自modF、modE、modA、modB和modC；并且(c)所述半乳糖代謝多肽選自galM、galK、galT和galE。

20.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌細胞，其中所述異戊二烯合酶多肽來自銀白楊(Populus?alba)。